[發明專利]一種快速定量檢測肌鈣蛋白和肌酸激酶同工酶的試劑盒

有效

• 申請號: 201610502580.3
• 申請日: 2016-06-28
• 公開（公告）號: CN106198997B
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發明（設計）人: 陳立國
• 申請（專利權）人: 廣州華弘生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/573;G01N33/543
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙)11470
• 代理人: 劉曄

1.一種快速定量檢測肌鈣蛋白和肌酸激酶同工酶的試劑盒，其特征在于，包括底板，所述底板上設有依次搭接的樣品墊、抗體結合墊I、抗體結合墊Ⅱ、包被有兩條檢測線和一條質控線的包被分析膜以及吸水墊，其中所述抗體結合墊I包被有與被生物素標記的抗肌鈣蛋白I單克隆抗體偶聯的免疫磁珠I，所述抗體結合墊Ⅱ包被有與抗肌酸激酶同工酶單克隆抗體偶聯的免疫磁珠Ⅱ，所述免疫磁珠I的表面包被有鏈霉親和素，所述兩條檢測線為包被肌鈣蛋白I單克隆抗體的檢測線I以及包被肌酸激酶同工酶單克隆抗體的檢測線Ⅱ，所述質控線固定有抗鼠IgG抗體；所述抗體結合墊I由以下步驟制得：

A)結合墊I的預處理：將玻璃纖維素膜或聚酯膜放入預處理液中浸泡3～6h，于35～39℃真空干燥35～40min，即得；其中所述預處理液為含有1.5～3％牛血清白蛋白、0.01～0.05％氯化鈉、0.01～0.03％氯化鈣、0.1～1％海藻糖和0.1～0.5％Tween-80的pH為7.5～8.1的Tris-HCl緩沖液；

B)免疫磁珠I的制備：

生物素標記的抗肌鈣蛋白I單克隆抗體的制備：將生物素與抗cTnI單克隆抗體按32～35:1的摩爾比混合，26～28℃反應0.6～1.0h后置于透析液I中3～7℃透析過夜，即得；

磁珠的洗滌：將100ml濃度為6～8㎎/ml的磁珠置于磁分離器中，磁吸3～6min，去上清液；用100ml磁珠洗滌液洗滌磁珠1～2次，將洗滌完畢后的磁珠置于2～8℃保存，備用；其中所述磁珠洗滌液為含有1.0～2.0％牛血清白蛋白和0.1～0.3％聚乙二醇的pH為7.8～8.2的Tris-HCl緩沖液；

偶聯：往上述洗滌后的磁珠加入偶聯緩沖液，再加入上述所得生物素標記的抗cTnI單克隆抗體，25～28℃反應2～3h，2～8℃保存，即得免疫磁珠I；其中所述偶聯緩沖液為含有0.01～0.04％Tween-20、0.1～0.3％海藻糖、0.5～1.0％牛血清白蛋白、0.01～0.05％氯化鈉和0.01～0.03％氯化鈣的pH為8.8～9.0的Tris-HCl緩沖液，所述磁珠在所述偶聯緩沖液中的含量為0.4～0.6㎎/ml，所述生物素標記的抗肌鈣蛋白I單克隆抗體在所述偶聯緩沖液中的含量為2～6μg/ml；

C)將上述所得免疫磁珠I用工作液I稀釋至濃度為200～300μg/ml，均勻噴涂于上述經預處理后的結合墊I上，于35～39℃真空干燥2～4h，即得抗體結合墊I；

其中，所述生物素為N-羥基琥珀酰亞胺生物素，所述透析液I為含有5～12％菊糖的pH為7.0～7.5的PBS緩沖液；所述工作液I為含有5～12％菊糖、2～5％二硫代蘇糖醇、0.05～0.1％鏈霉素以及0.5～1％EDTA-2Na的pH為7.2～7.4的Tris-HCl緩沖液。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述樣品墊由以下步驟制得：

將玻璃纖維素膜或聚酯膜放入含有1.5～3％牛血清白蛋白、0.01～0.5％曲拉通X-100、0.01～0.05％氯化鈉、0.01～0.03％氯化鈣和0.1～0.5％Tween-80的pH為7.5～8.1的Tris-HCl緩沖液中浸泡3～6h，于35～39℃真空干燥35～40min，即得。