[發明專利]從魚類的精液分離多脫氧核糖核苷酸的方法、由所述方法獲得的多脫氧核糖核苷酸及其用途

在審

• 申請號: 201610497384.1
• 申請日: 2016-06-29
• 公開（公告）號: CN107287186A
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發明（設計）人: 金德圭
• 申請（專利權）人: 達特珂貝怡股份有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N15/11;A61K31/711;A61K8/60;A61Q19/08;A61P17/02;A61P17/00;A61P17/14;A61P7/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙)11201
• 代理人: 宋融冰

1.一種從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，包括：

(1)將魚類的精液進行第1次離心分離，獲取包含精液細胞的沉淀物的步驟；

(2)將所述沉淀物添加于細胞溶解緩沖液，制造細胞溶解物后，使所述細胞溶解物消化的步驟；

(3)將經過所述(2)步驟的細胞溶解物進行第2次離心分離，獲取上清液的步驟；

(4)在根據所述(3)步驟而獲取的上清液中投入飽和氯化鈉水溶液并混合后，進行第3次離心分離，獲取包含DNA的上清液的步驟；

(5)在根據所述(4)步驟而獲取的上清液中投入乙醇并使DNA沉淀后，收集所述沉淀的DNA并進行干燥的步驟；及

(6)用物理方法破碎根據所述(5)步驟而獲得的DNA，獲取PDRN的步驟。

2.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

所述魚類為鮭魚科魚類。

3.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

所述魚類為虹鱒魚。

4.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

在所述(2)步驟中，所述細胞溶解緩沖液包括選自由Tris-HCl、NaCl及Na₂EDTA組成的組中的某一種或兩種以上。

5.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

在所述(2)步驟中，所述細胞溶解物的消化使用十二烷基硫酸鈉溶液、Na₂EDTA溶液及蛋白水解酶K溶液的混合溶液來執行。

6.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

在所述(2)步驟中，所述細胞溶解物的消化在30～39℃下執行12～20小時。

7.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

在所述(4)步驟中，所述上清液與所述飽和氯化鈉水溶液的投入比率為2:1至1:2的重量比。

8.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

借助于分光光度計測量的根據所述(5)步驟而獲取的DNA的純度(260nm/280nm)為1.8～2.2。

9.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

還包括：將在所述(5)步驟中獲得的干燥DNA溶解于去離子水后進行凍結干燥的步驟。

10.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

在所述(6)步驟中，所述物理方法為超聲波分解法。

11.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

所述(6)步驟包括：

(i)將根據所述(5)步驟而獲得的DNA溶解于選自由脫鹽水、食鹽水(0.9％NaCl)及磷酸鹽緩沖食鹽水組成的組中的某一種或兩種以上的混合溶液，制造DNA溶液的步驟；及

(ii)將所述DNA溶液進行超聲波分解的步驟。

12.根據權利要求11所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

所述DNA溶液的濃度為2～10mg/mL。

13.根據權利要求11所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

根據所述(i)步驟而制造的DNA溶液是在1～5℃下培養2～4小時后，進入所述(ii)步驟。

14.根據權利要求11所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，

所述超聲波分解在以所述DNA溶液的濃度10mg/mL為基準時，在1～5℃下執行5～30分鐘。

15.根據權利要求1所述的從魚類的精液分離PDRN的方法，其特征在于，還包括：

將根據所述(6)步驟而獲得的PDRN通過精密過濾膜進行過濾的步驟；

將通過所述過濾膜的PDRN進行凍結干燥的步驟；及

將所述凍結干燥的PDRN溶解于食鹽水的步驟。

16.一種根據權利要求1至15中任一項所述的方法從魚類的精液分離的PDRN。

17.一種利用權利要求16所述的PDRN制造的醫藥品或化妝品。