[發明專利]罐組裝動態逆流提取鐵皮石斛中石斛酚的工藝

有效

• 申請號: 201610480595.4
• 申請日: 2016-06-24
• 公開（公告）號: CN106220480B
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發明（設計）人: 朱培林;王國鑫;黃麗莉;陳金龍;何彬;宋喜紅
• 申請（專利權）人: 江西九草鐵皮石斛科技協同創新有限公司
• 主分類號: C07C41/34
• 分類號: C07C41/34;C07C41/36;C07C41/40;C07C41/44;C07C43/23
• 代理公司: 江西省專利事務所36100
• 代理人: 楊志宇

技術領域

本發明涉及植物有效成分提取領域，特別是一種采用罐組裝動態逆流法提取鐵皮石斛中石斛酚的工藝。

背景技術

鐵皮石斛為蘭科石斛屬多年生草本植物。石斛可分為黃草、金釵、馬鞭等數十種，鐵皮石斛在《中國藥典》2015年版有收載。鐵皮石斛為藥食兩用珍貴植物資源。鐵皮石斛因表皮呈鐵綠色而得名，為石斛之極品，以其莖入藥，嫩莖扭成螺旋狀或彈簧狀后曬干，商品稱為耳環石斛，又名楓斗，屬補益藥中的補陰藥。從中醫學角度總結鐵皮石斛主要的十大功效有：1、滋養陰津，2、增強體質，3、補益脾胃，4、護肝利膽，5、強筋降脂，6、降低血糖，7、抑制腫瘤，8、明亮眼睛，9、滋養肌膚，10、延年益壽。

鐵皮石斛中多糖含量一般在20-30％之間，其多糖成分與增強機體免疫機能、抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞、降血糖等藥理作用有著密切聯系。鐵皮石斛中不僅具有豐富的多糖成分通過抗氧化作用或增強機體細胞免疫功能間接抗腫瘤作用，還具有直接的抗癌活性物質基礎是其含有的菲類和聯芐類化合物，對腫瘤細胞的細胞周期以及細胞周期蛋白表達有影響，使癌細胞的增殖受到抑制。

特別目前，很多產品集中于開發鐵皮石斛中的多糖，對于提取多糖后的藥渣，尚不能得到充分、合理、有效高效的利用。本發明針對于多糖提取后的鐵皮石斛藥渣，對其中的有效聯芐類有效小分子—石斛酚進行高效富集和純化。

其中聯芐類化合物石斛酚((4-(3-羥基-5-甲氧基苯乙基)-2-甲氧基苯酚)具有抗誘變活性，可阻滯由脂多糖誘導的誘導型一氧化氮合酶和環氧合酶-2的表達。另據研究表明石斛酚是石斛中抗白內障的有效成分，它能有效抑制AR(醛糖還原酶)，改善糖尿病患者多元醇代謝通路異常，預防和延遲糖尿病及其并發癥白內障的發生和發展。

目前，尚未見關于石斛酚富集純化工藝研究報道，其有關含量測定法，主要采用包括浸漬法、滲漉法、水提煎煮法、回流提取法等傳統方法進行提取。隨著技術的不斷改進以及新型提取設備的研制，越來越多先進的提取分離手段被開發出來，本發明采用罐組裝動態逆流法提取的鐵皮石斛中石斛酚。

罐組式罐組裝動態逆流提取工藝，是將兩個以上的動態提取罐機組串聯，提取溶劑沿著罐組內各罐藥料的溶質濃度梯度逆向地由低向高順次輸送通過各罐，并與藥料保持一定提取時間并多次套用。此技術主要利用了固液(藥材與溶劑)兩相中有效成分的濃度梯度差，逐級將藥材中有效成分擴散至起始濃度較低的提取溶劑中，達到最大限度轉移藥材中有效成分的目的。采用罐組式逆流提取工藝，能有效地利用固液兩相的濃度梯度，增大濃度差，提取速率快，提取液的濃度增高，提取周期短，提取的同時利用藥材本體作濾層，可提高澄明度。

發明內容

本發明的目的主要在于開發高效富集純化鐵皮石斛中石斛酚的工藝，采用罐組式罐組裝動態逆流提取方式，通過合理排列各個提取單元之間提取液的濃度差，以及對鐵皮石斛藥材提取時間、提取溶劑、料液比等因素的優選，最終實現一種以盡量少的溶劑、時間、能耗最大限度的提取鐵皮石斛中石斛酚的切實可行的實施方案。采用活性碳脫色、大孔樹脂吸附和正相柱色譜以及重結晶等現代提取分離手段對石斛酚進行純化精制。

為達到目的，本發明工藝步驟包括：

(1)提取：將脫脂后的鐵皮石斛藥渣，加入體積為鐵皮石斛藥渣質量的10倍乙酸乙酯作提取溶劑，采用罐組式罐組裝動態逆流方式進行提取，濃縮至相對密度為1.10-1.15，得乙酸乙酯提取浸膏，備用；

(2)堿水處理：以浸膏與飽和碳酸溶液質量體積比1g:15-25ml，加入飽和碳酸鈉溶液，攪拌反應2-3小時后，3000r/min轉速離心，得上清液；

(3)除雜：往步驟(2)所得上清液中加入活性碳，攪拌1小時后，靜置3-24小時后，收集上清液，將殘留物濃縮至相對密度為1.10-1.15得浸膏；

(4)酸中和：往步驟(3)所得上清液中充二氧化碳氣體，以30mL/min氣體流速，連續充二氧化碳氣體1-2小時，得白色絮狀沉淀，離心，棄上清液，得沉淀，并用蒸餾水清洗兩遍；

(5)RP-C18反相硅膠純化：將沉淀用最小量無水乙醇溶解，制成濃溶液，供上反相硅柱膠層析分離；層析過程包括：①RP-C18反相硅膠預處理：使用95％乙醇充分浸泡，然后使用乙醇水梯度洗脫②上樣吸附：將含有石斛酚的浸膏乙醇水液抽濾后，上預先處理好的反相硅膠進行上樣吸附；③層析洗脫，上樣后，先以水，再以乙醇-水系統作為流動相梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤監測，收集含有石斛酚洗脫液；