[發(fā)明專利]一種以非編碼lnc?CXCL1及編碼基因cxcl1組合為檢測(cè)或診斷篩查標(biāo)志物的重癥肌無力檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610479234.8
• 申請(qǐng)日: 2016-06-27
• 公開（公告）號(hào): CN106119348B
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅朝輝;劉曉芳;徐立群;羅夢(mèng)川;楊歡;肖波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 長(zhǎng)沙正奇專利事務(wù)所有限責(zé)任公司43113
• 代理人: 馬強(qiáng),周棟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及以非編碼lnc-CXCL1及編碼基因cxcl1組合為檢測(cè)或診斷篩查標(biāo)志物的重癥肌無力檢測(cè)試劑盒及應(yīng)用。

背景技術(shù)

重癥肌無力(myasthenia gravis，MG)是神經(jīng)肌肉接頭相關(guān)疾病中最常見的自身免疫性疾病，典型的臨床表現(xiàn)為波動(dòng)性的全身骨骼肌易疲勞和無力，包括呼吸肌的受累。其在世界范圍內(nèi)的患病率約40-180/100萬，年發(fā)病率約為4-12/100萬，近年來隨著檢測(cè)技術(shù)的提高，新的抗體的不斷被發(fā)現(xiàn)，MG的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，尤其是晚發(fā)型MG。根據(jù)受累部位的不同、發(fā)病年齡的不同和血清抗體類型的不同，可將MG分為不同的亞型。盡管大多數(shù)MG的預(yù)后較好，但幾乎所有的MG需要長(zhǎng)時(shí)間的藥物治療，據(jù)統(tǒng)計(jì)仍有10-15％的患者不能用藥物完全控制疾病進(jìn)展或者以承受免疫抑制劑嚴(yán)重的副作用為代價(jià)，極大的影響了患者的生活質(zhì)量，加重了家庭與社會(huì)的負(fù)擔(dān)。因此對(duì)MG發(fā)病機(jī)制的研究和特異性治療藥物的開發(fā)正日益引起科研、臨床工作者的重視。

非編碼RNA(Non-coding RNA，ncRNA)是指在基因轉(zhuǎn)錄后不能繼續(xù)進(jìn)行翻譯的RNA分子，其中具有調(diào)控作用的稱為調(diào)控非編碼RNA，調(diào)控非編碼RNA根據(jù)其片段的長(zhǎng)度可粗略分為短鏈非編碼RNA(miRNA、siRNA和piRNA等)和長(zhǎng)鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)。LncRNAs是長(zhǎng)度大于200bp的長(zhǎng)鏈RNA分子。全基因組水平非編碼基因序列的研究發(fā)現(xiàn)，在人類基因組中大約有10,000～200,000種不同類型lncRNAs被轉(zhuǎn)錄。LncRNA的來源不一，可以為編碼基因結(jié)構(gòu)的中斷、ncRNAs復(fù)制過程中的反向移位、染色質(zhì)的重排、編碼基因開放閱讀框的突變以及轉(zhuǎn)位子插入到編碼基因的片段等等。近年來的研究表明，lncRNAs具有廣泛的生物學(xué)功能，可通過以下機(jī)制參與細(xì)胞凋亡、分化、發(fā)育等多種重要的調(diào)控過程：1.募集染色體重塑復(fù)合體到特定的基因位點(diǎn)來標(biāo)記基因沉默區(qū)域；2募集轉(zhuǎn)錄因子來促進(jìn)或抑制基因表達(dá).；3.轉(zhuǎn)錄基因的反義鏈lncRNA可調(diào)控轉(zhuǎn)錄基因相應(yīng)mRNAs的剪接或引導(dǎo)其降解。LncRNAs在免疫系統(tǒng)中也有著不可忽視的作用，它參與了免疫細(xì)胞的活化和分化。LncRNA可以調(diào)控CD8⁺T細(xì)胞和CD4⁺T細(xì)胞的激活與分化，并且隨著T細(xì)胞的分化而呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)的變化，對(duì)T細(xì)胞的發(fā)育凋亡起關(guān)鍵作用。Bolland et al.的一項(xiàng)研究報(bào)道，一些lncRNA在染色質(zhì)重塑過程中可以影響TCR或Ig的V/D/J的重排。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，在IgH可變區(qū)的lncRNA可影響前體B細(xì)胞在該位點(diǎn)的空間結(jié)構(gòu)，從而影響B(tài)細(xì)胞分化。LncRNA也可以調(diào)控樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)分化。最近一項(xiàng)新的研究發(fā)現(xiàn)人lnc-DC特定表達(dá)于單核細(xì)胞源性DC的細(xì)胞漿中，通過與DC分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子STAT3的羧基端直接接合，從而調(diào)控DC的分化，對(duì)DC的功能也起著關(guān)鍵的作用。反義lncRNA還可以參與炎癥反應(yīng)調(diào)控固有免疫應(yīng)答，其可能的機(jī)制為炎癥刺激時(shí)促使很多l(xiāng)ncRNAs的異常表達(dá)，尤其是巨噬細(xì)胞分布豐富的組織，異常表達(dá)的lncRNAs通過與核不均-核糖核蛋白(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein,hnRNP)結(jié)合調(diào)控免疫炎癥相關(guān)的編碼基因的表達(dá)，或者位于編碼基因上游，作為反義鏈反向調(diào)控編碼基因的表達(dá)，最終促使單核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞而發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。

編碼基因cxcl1是CXCR2⁺家族細(xì)胞的趨化因子，如中性粒細(xì)胞；非編碼Lnc-CXCL1是編碼cxcl1的不表達(dá)的不同轉(zhuǎn)錄本，其表達(dá)和生物學(xué)功能還未見報(bào)道。因此本實(shí)驗(yàn)中我們采用熒光定量PCR同時(shí)檢測(cè)了非編碼Lnc-CXCL1和編碼基因cxcl1在MG患者和正常對(duì)照組中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)非編碼Lnc-CXCL1和編碼基因cxcl1的ΔC_T表達(dá)上升，即相對(duì)表達(dá)下降，根據(jù)這個(gè)結(jié)果，研制一種以非編碼lnc-CXCl1及編碼基因cxcl1為檢測(cè)或診斷篩查標(biāo)志物的重癥肌無力檢測(cè)試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種以非編碼Lnc-CXCL1及編碼基因cxcl1組合為檢測(cè)或診斷篩查標(biāo)志物的重癥肌無力檢測(cè)試劑盒。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：

所述以非編碼lnc-CXCL1及編碼基因cxcl1組合為檢測(cè)或診斷篩查標(biāo)志物的重癥肌無力檢測(cè)試劑盒包括如下引物對(duì)：