[發(fā)明專利]一種糖基化檢測的人凝集素/類人凝集素芯片及制備方法

有效

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• 申請日: 2016-06-24
• 公開（公告）號: CN107541790B
• 公開（公告）日: 2021-07-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陶生策;孫洋洋;程莉;周樹敏;郭書娟
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學
• 主分類號: C40B40/10
• 分類號: C40B40/10;G01N33/68
• 代理公司: 上海漢聲知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

本發(fā)明公開了生物科學領(lǐng)域的一種糖基化檢測的人凝集素/類人凝集素芯片及制備方法，是基于重組人凝集素/類人凝集素蛋白質(zhì)構(gòu)建的。所述重組蛋白質(zhì)是60種能夠識別和結(jié)合不同糖基的人凝集素/類人凝集素蛋白質(zhì)。與傳統(tǒng)的植物凝集素芯片相比，人凝集素/類人凝集素芯片對高等脊椎動物樣本的復(fù)雜糖型有更特異的識別能力和更強的結(jié)合能力。人凝集素/類人凝集素芯片為糖組學研究提供了新的技術(shù)平臺，可廣泛應(yīng)用于人或其他哺乳動物的糖基化研究。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物科學領(lǐng)域，特別涉及一種糖基化檢測的人凝集素/類人凝集素芯片及制備方法，該芯片可通過其上的人凝集素/類人凝集素蛋白與糖基或糖結(jié)構(gòu)特異性識別和結(jié)合，來分析生物樣本的糖基化情況及糖基化水平的變化。

背景技術(shù)

糖基化是生物體中最重要的翻譯后修飾，50％以上的蛋白質(zhì)存在糖基化修飾。糖基化在蛋白質(zhì)折疊，細胞生長、分裂、分化中起關(guān)鍵作用，能夠作為受體識別細胞外信號，也能夠激活生物體中的免疫反應(yīng)等等。一些生理病理過程也與糖基化密切相關(guān)，例如，精子細胞表面的糖能夠影響精子的運動及受精能力，癌細胞表面的唾液酸增加能夠促進癌細胞的遷移。

與無脊椎動物相比，脊椎動物的糖譜更加復(fù)雜。了解人體中糖基的組成，結(jié)構(gòu)以及發(fā)生的改變能夠使我們更好的了解糖基化的功能以及它們在疾病中起的作用，進而指導疾病的診斷和治療。傳統(tǒng)的糖基化分析方法主要有液相色譜、質(zhì)譜等技術(shù)，但是這些方法人力物力消耗大，并且無法進行快速、系統(tǒng)、實時的糖基化分析。

作為一種高通量的糖基化分析檢測平臺，憑借其獨特的優(yōu)勢，如體積小、通量高、分析檢測速度快、樣品需求量少等，植物凝集素芯片已被廣泛的應(yīng)用于原核、真核微生物糖基化的分析，精子細胞表面糖基化的研究以及癌細胞表面糖基化的鑒定等等。植物凝集素芯片可以很好的解析樣品的糖型結(jié)構(gòu)及糖基化水平或糖鏈結(jié)構(gòu)的改變，但是植物凝集素芯片有時無法解析哺乳動物，尤其是人體中的復(fù)雜糖型。

人體中也存在一類凝集素或類凝集素蛋白質(zhì)，大多數(shù)是整合在細胞膜上的跨膜蛋白質(zhì)，也有部分是可溶性蛋白質(zhì)和分泌蛋白質(zhì)。人凝集素蛋白在調(diào)節(jié)人體內(nèi)細胞的黏附，糖蛋白的合成以及控制血液中蛋白的水平中起著關(guān)鍵作用，作為一種內(nèi)源性的蛋白質(zhì)，人凝集素或類凝集素能夠更特異的識別人體中的復(fù)雜糖鏈，并且它們之間的結(jié)合力更強。因此，與植物凝集素芯片比較，人凝集素芯片能夠更好的幫助我們對人體生理或病理情況下的糖組學進行研究。

因大部分人凝集素或類人凝集素為膜蛋白，具有重組表達量少，分離純化效率低、易失活等缺點，阻礙了其研究進程。目前未見有人凝集素芯片的報道。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，為了彌補質(zhì)譜等技術(shù)在蛋白質(zhì)糖基化研究領(lǐng)域的不足，強化凝集素芯片的優(yōu)勢，本發(fā)明的目的在于構(gòu)建一種糖基化檢測的人凝集素類人凝集素芯片及制備方法，該芯片包含60種人凝集素/類人凝集素蛋白質(zhì)，芯片質(zhì)檢及人凝集素活性驗證表明，該人凝集素芯片可用于生物樣本的糖基化分析。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

第一方面，本發(fā)明提供一種糖基化檢測芯片，所述芯片上的糖基化檢測蛋白為人凝集素/類人凝集素蛋白質(zhì)。