[發(fā)明專利]立達(dá)霉在草魚體內(nèi)的代謝物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610466420.8
• 申請(qǐng)日: 2016-06-23
• 公開（公告）號(hào): CN106431962B
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂新美;董亞萍;胡鯤;孫晶;姜鶯穎;張一柳;劉力碩;程俊茗;朱鳳嬌;吳映捷;董龍香;范寧寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海海洋大學(xué)
• 主分類號(hào): C07C235/68
• 分類號(hào): C07C235/68;G01N30/02
• 代理公司: 上海卓陽知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)31262
• 代理人: 周春洪

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是立達(dá)霉在草魚體內(nèi)的代謝物。

背景技術(shù)

草魚(Ctenopharyngodon idellus)屬鯉形目鯉科雅羅魚亞科草魚屬，棲息于平原地區(qū)的江河湖泊，一般喜居于水的中下層和近岸多水草區(qū)域。性活潑，游泳迅速，常成群覓食，為典型的草食性魚類。草魚幼魚期則食幼蟲，藻類等，草魚也吃一些葷食，如蚯蚓，蜻蜓等，在干流或湖泊的深水處越冬。生殖季節(jié)親魚有溯游習(xí)性。因其生長(zhǎng)迅速，飼料來源廣，是中國(guó)淡水養(yǎng)殖的四大家魚之一，為中國(guó)主要淡水魚類養(yǎng)殖對(duì)象。

水霉菌(Saprolegnia)是淡水養(yǎng)殖水體中常見的真菌種類，幾乎感染所有的淡水魚類。孔雀石綠是防治魚類寄生蟲、真菌或細(xì)菌感染的特效藥，但具有高毒性、高殘留、致癌、致畸、致突變等毒副作用，已被列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其化合物清單》。立達(dá)霉(也稱作甲霜靈)是一種酰胺類殺菌劑，其性能較穩(wěn)定，對(duì)pH范圍(1.0-9.0)、高溫度和強(qiáng)光具有耐受性，在防治水霉病方面具有良好的效果。

科技文獻(xiàn)中有不少關(guān)于立達(dá)霉使用后再環(huán)境及動(dòng)植物中殘留消除規(guī)律的報(bào)道，例如，王鋒等通過¹⁴C-甲霜靈研究了甲霜靈在黃瓜體內(nèi)的傳導(dǎo)規(guī)律；王化國(guó)等在田間生態(tài)箱中研究了¹⁴C-甲霜靈在土壤-煙草系統(tǒng)的遷移與歸宿；Buser等研究表明立達(dá)霉在土壤中比較穩(wěn)定；曹愛華等研究了精甲霜靈在鮮煙葉、土壤中的消除規(guī)律；任阿芳研究了甲霜靈在水稻上的殘留動(dòng)態(tài)及其光降解情況；胡娟研究了甲霜靈在水中的光化學(xué)降解規(guī)律。

專利文獻(xiàn)中有不少關(guān)于立達(dá)霉殘留的報(bào)道，例如，中國(guó)專利文獻(xiàn)CN104535671A公開了一種茄子中甲霜靈殘留的檢測(cè)方法，中國(guó)專利文獻(xiàn)CN105259351A公開了一種檢測(cè)甲霜靈試紙，中國(guó)專利文獻(xiàn)CN104391068A公開了一種測(cè)定煙草中常用殺菌劑(如甲霜靈等)殘留量的方法，中國(guó)專利文獻(xiàn)CN1959406A公開了一種甲霜靈等在蔬菜中殘留的檢測(cè)方法，但是關(guān)于本發(fā)明的立達(dá)霉在草魚體內(nèi)的代謝物目前還未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供立達(dá)霉在草魚體內(nèi)的代謝物。

本發(fā)明的再一的目的是，提供立達(dá)霉的一種新用途。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：立達(dá)霉在草魚體內(nèi)的代謝物，所述的代謝物為N-(2-羧基-6-苯甲基)-N-(甲氧乙酰基)丙氨酸、N-(2-羥甲基)-6-甲苯基-N-(羥乙酰基)丙氨酸、N-(2,6-二甲苯基)-N-(羥乙酰基)丙氨酸或N-(2-羥甲基-6-苯甲基)-N-(甲氧乙酰基)丙氨酸甲酯。

所述的立達(dá)霉在草魚體內(nèi)的代謝物作為草魚組織中立達(dá)霉殘留檢測(cè)標(biāo)識(shí)物的用途。

所述的草魚組織為草魚肝臟組織。

所述的立達(dá)霉在草魚體內(nèi)的代謝物的HPLC分析方法，其特征在于，柱溫30℃，流動(dòng)相A為0.1％的甲酸水溶液，流動(dòng)相B為10％的甲醇甲醛溶液，洗脫梯度：0～0.5min，5％B；0.5～2min，5％～25％B；2～3min，25％～80％B；3～4min，80％～95％B；流速0.3mL/min^-1，進(jìn)樣量5μL。

所述的制備方法包括以下步驟：1)對(duì)草魚進(jìn)行立達(dá)霉給藥；2)用甲醇提取草魚肝臟組織，再用正己烷萃取甲醇提取液，然后濃縮甲醇提取液。

立達(dá)霉給藥方式為口灌，口灌的給藥量為200mg/kg。

立達(dá)霉給藥方式為浸泡，立達(dá)霉浸泡濃度為9mg/L。

步驟2)為：稱取5g草魚肝臟組織于離心管中，加入20mL甲醇，漩渦振蕩5min，8000r/min離心10min，取上清；用20mL甲醇溶解沉淀，漩渦振蕩5min，8000r/min離心10min，合并上清；合并的上清液加入40mL正己烷，漩渦振蕩后，靜置10min，取下層清液，30℃于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸發(fā)至近干。

為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：立達(dá)霉作為草魚組織中立達(dá)霉殘留檢測(cè)標(biāo)識(shí)物的用途。

所述的草魚組織為草魚肝臟組織。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：

1、本發(fā)明對(duì)草魚口灌或浸泡立達(dá)霉，首次發(fā)現(xiàn)在口灌組和浸泡組中，肝臟組織中的立達(dá)霉以原型藥為主，并發(fā)現(xiàn)了4種立達(dá)霉在草魚體內(nèi)的代謝物：N-(2-羧基-6-苯甲基)-N-(甲氧乙酰基)丙氨酸、N-(2-羥甲基)-6-甲苯基-N-(羥乙酰基)丙氨酸、N-(2,6-二甲苯基)-N-(羥乙酰基)丙氨酸、N-(2-羥甲基-6-苯甲基)-N-(甲氧乙酰基)丙氨酸甲酯。