[發明專利]一種高芽孢率的地衣芽孢桿菌發酵方法

有效

• 申請號: 201610465343.4
• 申請日: 2016-06-22
• 公開（公告）號: CN107523512B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 高興強;王曉飛;張敏潔
• 申請（專利權）人: 浙江京新藥業股份有限公司;上海京新生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/742;A61P1/00;C12R1/10
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 賈師英

1.一種提高地衣芽孢桿菌的芽孢率的發酵方法，其特征在于，分為下述兩個階段：在pH7.0-7.5的培養基中接種地衣芽孢桿菌，于36-38℃發酵培養至20-26h；然后調節并控制發酵液至pH8.0-8.5，于36-38℃繼續發酵培養，至從接種時起30-36h時停止發酵，收獲菌體，發酵液的pH通過流加pH調節劑的方式進行控制，所用pH調節劑選自無機酸、無機堿，所述培養基為營養肉湯培養基，所述地衣芽孢桿菌是保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心、保藏編號為CGMCC NO.0183的菌株。

2.如權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，包括如下步驟：

a)種子活化培養：將地衣芽孢桿菌菌種接種于pH7.0-7.5的種子活化培養基中，于36-38℃搖床培養4-10h，得種子活化培養液；

b)種子培養：將步驟a)得到的種子活化培養液以體積分數1-10％的接種量接種于pH7.0-7.5的種子培養基中，于36-38℃培養4-10h，得種子培養液；

c)發酵培養：將步驟b)得到的種子培養液以體積分數10-30％的接種量接種到pH7.0-7.5的發酵培養基中，于36-38℃培養20-26h；

d)后期發酵培養：調節并控制發酵液至pH8.0-8.5，于36-38℃繼續發酵培養，至從接種時起30-36h時停止發酵，收獲菌體。

3.如權利要求2所述的發酵方法，其特征在于，步驟a)中所述種子活化培養基為營養肉湯培養基，組成如下：蛋白胨10g/L，牛肉浸粉3g/L，氯化鈉5g/L。

4.如權利要求2所述的發酵方法，其特征在于，步驟b)中所述種子培養基為營養肉湯培養基，組成如下：蛋白胨10g/L，牛肉浸粉3g/L，氯化鈉5g/L。

5.如權利要求2所述的發酵方法，其特征在于，步驟c)中所述發酵培養基是營養肉湯培養基，組成如下：蛋白胨10g/L，牛肉浸粉3g/L，氯化鈉5g/L。

6.如權利要求2所述的發酵方法，其特征在于，在步驟c)和d)的發酵培養中，溶氧保持在20-50％。

7.如權利要求1所述的發酵方法，其特征在于，在步驟d)的發酵培養中，pH調節劑選自磷酸、鹽酸、氨水。