[發明專利]一種人IL1RAP特異性CAR及其應用

有效

• 申請號: 201610456859.2
• 申請日: 2016-06-22
• 公開（公告）號: CN106831998B
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 趙愷;徐開林;尹玲玲;袁姝姝;陳翀
• 申請（專利權）人: 徐州醫科大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K39/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺

本發明公開了一種人IL1RAP特異性CAR及其應用，所述CAR由IL1RAP特異性單鏈抗體scFV、共刺激分子和T細胞的活化CD3ζ鏈組成，其中scFV包含IL1RAP單克隆抗體McAb重鏈、輕鏈的可變區基因片段，共刺激分子為CD137。與現有技術相比，本發明具有以下優點：(1)本發明所述人IL1RAP特異性CAR引入CD137協同共刺激分子，提高了IL1RAP特異性CAR病毒轉染T細胞后T細胞活化率，增強其對腫瘤細胞的殺傷能力；(2)本發明所述IL1RAP特異性CAR?T細胞不僅可以發揮殺傷白血病細胞的作用，而且可在體內形成長壽的抗原特異性記憶T細胞，從而及時清除新生的白血病細胞。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種嵌合受體，尤其涉及一種人IL1RAP特異性CAR及其應用。

背景技術

慢性髓系白血病(Chronic Myelogenous Leukemia,CML)是一種發生在多能造血干細胞上的惡性骨髓增生性疾病，約占白血病的20％，以9號和22號染色體易位t(9；22)(q34；q11)形成的費城染色體(Ph)為特征。該易位形成一種新的融合基因BCR-ABL，此基因編碼的融合蛋白p210或p190具有激活的酪氨酸激酶活性，導致髓系造血的異常克隆性增殖，是CML發生發展的根本原因，也是治療CML的重要靶點。以伊馬替尼為代表的酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitor,TKI)，通過抑制BCR-ABL自身磷酸化和底物磷酸化而抑制細胞增殖和誘導凋亡，現已成為CML患者的一線治療藥物。盡管該藥具有良好的療效，但其對靜息狀態的白血病干細胞(leukemia stem cell,LSC)無效，使患者易產生耐藥性及停藥后復發，且存在部分患者原發耐藥及可繼發骨病等重大缺陷，導致其臨床應用效果仍不能令人滿意。因此，有效清除LSC可能在根本上改變CML的治療現況，是當前治療CML亟待解決的問題。

LSC自從被發現后就成為研究的熱點，人們試圖尋找到區分LSC和造血干細胞(hematopoietic stem cell,HSC)的表面標志。IL-1受體輔助蛋白(IL-1receptoraccessory protein,IL1RAP)是Toll-like受體超家族的一名成員，是IL-1RⅠ的共受體。IL1RAP基因位于人3號染色體q28，位于小鼠的16號染色體，編碼570個氨基酸。RNA不同的剪切形式可形成膜型IL1RAP和可溶型IL1RAP兩種形式，膜型IL1RAP是IL-1受體復合物的重要組成部分。最近研究表明，IL1RAP蛋白在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)病人的LSC表面過表達，且IL1RAP表達水平和AML的臨床預后密切相關，沉默IL1RAP可降低AML細胞克隆集落形成，促進細胞凋亡。2010年Jaras等研究發現，IL1RAP在CML病人的LSC上表達顯著升高，但在CD34⁺CD38^-的正常HSC上無表達或僅低表達。而在幾乎所有正常的造血干細胞和成熟的各個細胞亞群上，IL1RAP的表達均為陰性或弱陽性。此外，研究表明胚胎期過度的IL-1/IL-1R1/IL1RAP信號限制HSC向髓系細胞正常分化，阻斷IL1RAP則切斷白血病細胞對外源和自分泌IL-1的利用，使白血病細胞增殖率、克隆形成率、克隆刺激活性明顯下降。綜上可見，在CML中IL1RAP是區分LSC和HSC特異的細胞表面標志，能誘導細胞免疫和體液免疫應答。針對IL1RAP設計藥物或者疫苗，可避免正常組織損傷或自身免疫病。