[發(fā)明專利]一種高效穩(wěn)定表達抗體的NK細胞及其用途

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610445517.0
• 申請日: 2016-06-20
• 公開（公告）號: CN107523546A
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發(fā)明（設計）人: 錢其軍;金華君;劉輝;李林芳;葉真龍;王超;崔連振;吳紅平
• 申請（專利權）人: 上海細胞治療研究院;上海細胞治療工程技術研究中心集團有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00;A61P31/12;A61P31/04;A61P37/02;C12N15/85
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司31100
• 代理人: 韋東

1.一種轉基因NK細胞，其特征在于，所述NK細胞的基因組中穩(wěn)定整合了包含人Fc段的抗體的編碼序列的表達框，且表達框的兩端包含轉座子的反向末端重復序列。

2.如權利要求1所述的轉基因NK細胞，其特征在于，每百萬個所述NK細胞在48小時內(nèi)表達的抗體量高于2μg。

3.如權利要求1所述的轉基因NK細胞，其特征在于，所述轉座子選自：piggybac、sleeping beauty、frog prince、Tn5和Ty；優(yōu)選地，所述轉座子為piggybac。

4.如權利要求1所述的轉基因NK細胞，其特征在于，所述NK細胞選自：原代NK細胞、NK細胞株和NKT細胞；優(yōu)選地，所述NK細胞為原代NK細胞。

5.如權利要求1所述的轉基因NK細胞，其特征在于，所述NK細胞還包含剎車分子，該剎車分子為可被已上市抗體藥物識別的膜抗原；優(yōu)選地，所述膜抗原選自CD11a、CD15、CD19、CD20、CD25、CD44、CD47、CD52、EGFR、ERBB2、ERBB3、ERBB4、VEGFR1、VEGFR2、EpCAM、MSLN、GPIIb/IIIa、α4整合素和α4β7整合素；優(yōu)選地，所述膜抗原為CD20。

6.如權利要求1所述轉基因NK細胞，其特征在于，所述抗體為抗腫瘤或抗病毒的抗體，優(yōu)選自：免疫檢查點抗體、T細胞共刺激信號抗體、抗新生血管生成的抗體、抗腫瘤細胞生長因子受體的抗體、抗腫瘤細胞膜抗原的抗體和抗病毒抗體。

7.如權利要求1所述的轉基因NK細胞，其特征在于，所述抗體針對如下抗原中的一種或多種：EGFR、EGFRvIII、ERBB2、ERBB3、ERBB4、MUC1(粘蛋白1，細胞表面相關的)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD30、CD33、CD44v7/8、CD70、VEGFR1、VEGFR2、IL-11Rα、EGP-2、EGP-40、FBP、GD3(又稱ST8SIA1，ST8α-N-乙酰基-神經(jīng)酰胺α-2,8-唾液酸轉換酶1)、PSCA(前列腺干細胞抗原)、FSA(又稱KIAA1109)、PSA(又稱KLK3，激肽釋放酶相關的肽酶3)、HMGA2、胎兒型乙酰膽堿受體、LeY(又稱FUT3)、EpCAM、MSLN(間皮素)、IGFR1、CA125(又稱MUC16，粘蛋白16，細胞表面相關)、CA15-3、CA19-9、CA72-4、CA242、CA50、CYFRA21-1、SCC(又稱SERPINB3)、AFU(又稱FUCA1)、EBV-VCA、POA(又稱VDR，維生素D(1,25-二氫維生素D3)受體)、β2-MG(β-2-微球蛋白)和PROGRP(GRP胃泌素釋放肽)、GD2(又稱B4GALNT1，β1,4-乙酰基-氨基半乳糖基轉移酶1)、FR(Flavin還原酶)、PSMA(前列腺特異性膜抗原)、gp100(PMEL前黑素小體蛋白)、CA9(碳酸酐酶IX)、CD171/L1-CAM、IL-13Rα2、MART-1(又稱melan-A)、NY-ESO-1(又稱CTAG1B，癌/睪丸抗原1B)、MAGE(黑素瘤相關抗原E1)家族蛋白、BAGE(B黑素瘤抗原家族)家族蛋白、GAGE(生長激素釋放因子)家族蛋白、AFP(α-胎蛋白)、CEA、PD-1、CTLA4、PDL1、PDL2、PDL3、TIM3、LAG3、CD28、CD137、CD40、CD40L、CD47、乙肝病毒和艾滋病毒；優(yōu)選地，所述抗體為HER2抗體。

8.如權利要求1-8中任一項所述的轉基因NK細胞，其特征在于，所述轉基因NK細胞轉入了以下核酸構建物A和B：

核酸構建物A：含有轉座子5’反向末端重復序列(5’ITR)、包含人Fc段的抗體的編碼序列及控制該核酸序列表達的啟動子、polyA加尾信號序列和轉座子3’反向末端重復序列(3’ITR)；

核酸構建物B：含有轉座子5’反向末端重復序列(5’ITR)、編碼剎車分子的核酸序列及控制該核酸序列表達的啟動子、polyA加尾信號序列、轉座子3’反向末端重復序列(3’ITR)、轉座酶編碼序列和任選的控制轉座酶編碼序列表達的啟動子；

任選地，采用病毒轉導、顯微注射、粒子轟擊、基因槍轉化和電轉中的一種或多種方法將所述核酸構建物轉入所述細胞中，優(yōu)選地采用電轉。