[發(fā)明專利]嗜肺軍團菌熒光定量引物及探針、檢測方法及試劑盒在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610438683.8 | 申請日： | 2016-06-17 |
| 公開（公告）號： | CN107513559A | 公開（公告）日： | 2017-12-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 柳輝 | 申請（專利權(quán)）人： | 深圳康美生物科技股份有限公司;北京康美天鴻生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳市深佳知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)44285 | 代理人： | 王仲凱 |
| 地址： | 518057 廣東省深圳市南山*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 軍團 熒光 定量 引物 探針 檢測 方法 試劑盒 | ||
1.嗜肺軍團菌熒光定量檢測引物組，其特征在于，包括如SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的上游引物和如SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的下游引物。
2.嗜肺軍團菌熒光定量檢測探針，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的嗜肺軍團菌熒光定量檢測探針，其特征在于，3’端標記有MGB淬滅基團；5’端標記有6-FAM發(fā)光基團。
4.嗜肺軍團菌檢測試劑盒，其特征在于，包括：SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的上游引物、SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的下游引物，和SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探針。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的嗜肺軍團菌檢測試劑盒，其特征在于，還包括樣品處理液；所述樣品處理液中包括以下濃度的組分：
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的嗜肺軍團菌檢測試劑盒，其特征在于，所述上游引物、下游引物和探針存在于PCR反應(yīng)液A中；
所述PCR反應(yīng)液A中包括：PCR Buffer、MgCl2、dNTP/dUTP、BSA、上游引物、下游引物和探針。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的嗜肺軍團菌檢測試劑盒，其特征在于，還包括PCR反應(yīng)液B、陰性對照和陽性對照；
所述PCR反應(yīng)液B中包括：Taq DNA聚合酶和UDG酶；
所述陰性對照包括Tris-Hcl和EDTA；
所述陽性對照為嗜肺軍團菌質(zhì)粒。
8.嗜肺軍團菌的檢測方法，其特征在于，包括：以如SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的上游引物、如SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的下游引物擴增待測樣品，以如SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探針檢測，經(jīng)熒光定量PCR獲得熒光信號。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述待測樣品經(jīng)過前處理，所述前處理為將待測樣品以堿處理后，離心留取沉淀與樣品處理液混合100℃處理10min后，離心留取上清液。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述real-time PCR檢測的程序為：
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