[發明專利]一種檢測黃曲霉毒素B1的熒光免疫層析試紙

有效

• 申請號: 201610427126.6
• 申請日: 2016-06-14
• 公開（公告）號: CN106018795B
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 李靖靖;職愛民;聶卉;趙國欣;王嵐;閔玉濤;張小梅;孫浩冉;郭林;楊聯芝
• 申請（專利權）人: 中州大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/533;G01N33/543
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙)41122
• 代理人: 張愛軍

技術領域

本發明涉及一種免疫層析試紙，特別是涉及一種檢測黃曲霉毒素B₁的熒光免疫層析試紙。

背景技術

黃曲霉毒素B₁(Aflatoxin B₁，稱AFB₁)是由黃曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)和特曲霉(Aspergillus nomius)產生的真菌次級代謝產物。AFB₁常天然存在于花生、棉籽、玉米、小麥和稻米等農作物中，檢出率高，具有強烈的毒性和致癌性，屬于I類致癌物。我國AFB₁對糧食和飼料的危害有不少報道，檢出率高達80％～100％，可抑制動物免疫機能，降低動物生產性能，引起動物繼發感染，甚至死亡，同時還可在動物產品中殘留而威脅人類健康。因此針對AFB₁開展有效的快速檢測很有意義。我國國家標準GB 13078規定，在玉米、花生餅(粕)、棉籽餅(粕)、豆粕中AFB₁最高殘留限量≤50μg/kg，在畜禽類飼料中AFB₁最高殘留限量≤20μg/kg。目前，用于AFB₁的檢測方法主要有生物鑒定法、化學分析法、儀器分析法和免疫分析法4大類。生物鑒定法的優點是待檢樣品不需很純，缺點是靈敏度低、實驗周期較長。化學分析法的優點是經濟實用，但不能準確定量，且分析結果的可重復性和再現性差。儀器分析法具有高分離、高檢測效能及快速分析能力等優勢，但對樣品的前處理要求高，對操作人員技術要求高，且儀器設備價格昂貴，不適于快速檢測。免疫分析法操作簡單，成本低，而且具有較好的準確性和靈敏性，同時能進行定性和半定量或一定定量的檢測，適合于對大量樣品的篩查，是目前優先發展的檢測技術。

未修飾的氧化石墨烯表現出很弱的熒光，在紫外光照射下用肉眼基本上觀察不到熒光。這是由于氧化石墨烯納米片表面有很多含氧基團，例如納米片表面上的環氧鍵和羥基，納米片側面的羧基，這些基團通常能誘導電子-空穴對的非輻射復合，從而導致氧化石墨烯的熒光很弱。經過正丁胺修飾以后，氧化石墨烯納米片表面的環氧鍵和羧基都被反應掉，這將極大地降低其非輻射復合能力。因此修飾后，氧化石墨烯表現出很強的熒光可作為新型標記物在生物檢測領域應用。雖然膠體金試紙在此方面應用較廣，但其不能做到定量檢測，作為更敏感、穩定、靈活、安全的氧化石墨烯熒光層析試紙的研究，是膠體金免疫檢測技術的有力補充。

上轉換熒光納米顆粒經過表面修飾與活化后，作為新型標記物在生物檢測等領域進行應用。因其獨特的物理結構和光學特性，使上轉換熒光免疫試紙法與理化檢測與微生物檢測技 術相比，具有靈敏度高，操作過程簡單，成本低及能進行大批量現場檢測的特點；與膠體金試紙相比，具備定量檢測的特色，作為更敏感、穩定、靈活、安全的UPT-LF的研究，是膠體金免疫檢測技術的有力補充。但是目前上轉換熒光材料的制備和試紙的研究仍存在發光效率不夠，熒光材料種類少等缺陷，丞待加強該方面的研究和探討。

下轉換熒光納米顆粒具有高靈敏度，是一種完全惰性的無機發光材料，具有獨特物理結構和光學特性，可作為新型標記物應用在生物檢測領域。將其與生物學、免疫學、材料學相結合而開發的用于AFB₁快速檢測的下轉換熒光納米顆粒標記免疫層析方法，在靈敏、穩定、靈活方面顯示了優異的特性，是膠體金免疫檢測技術的有利補充。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種檢測黃曲霉毒素B₁的熒光免疫層析試紙，該試紙具有特異、靈敏、快速、簡便等特點，能定量檢測食品、飼料、中草藥、尿液中的黃曲霉毒素B₁。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：

一種檢測黃曲霉毒素B₁的熒光免疫層析試紙，包括支撐體和固定在支撐體上的吸附層，吸附層從測試端開始依次為吸附纖維層、熒光抗體纖維層、纖維素膜層及吸水材料層，所述的纖維素膜層上設有用偶聯AFB₁的載體蛋白溶液印制的隱形檢測印跡和用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗體溶液印制的隱形對照印跡；所述的熒光抗體纖維層采用吸附熒光抗體的玻璃纖維棉制成，熒光抗體為氧化石墨烯熒光納米材料、NaYF₄:Yb,Tm納米顆粒或NaGd(WO₄)₂：Eu³⁺納米顆粒標記的AFB₁單克隆抗體或者多克隆抗體。