[發明專利]抗腫瘤融合蛋白及其制法和應用

有效

• 申請號: 201610423430.3
• 申請日: 2016-06-15
• 公開（公告）號: CN107513107B
• 公開（公告）日: 2022-03-15
• 發明（設計）人: 王慶誠;葉丹榮;沈如凌;費儉
• 申請（專利權）人: 上海南方模式生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/12;A61K38/46;A61K38/18;A61K47/62;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 陳詳;劉妍珺

本發明提供了一種抗腫瘤融合蛋白及其在抗腫瘤中的應用。具體地，本發明提供了一種由核糖核酸酶Amphinase和轉化生長因子TGFα或表皮生長因子EGF構成的抗腫瘤融合蛋白。本發明的抗腫瘤融合蛋白不僅保持有Amphinase的原有活性，還具有顯著地抑制高表達EGFR的腫瘤細胞生長的活性，可以廣泛用于抗腫瘤的治療。本發明還提供了含有所述融合蛋白的藥物組合物，和制備所述融合蛋白的方法。

技術領域

本發明涉及DNA重組技術和生物藥物領域。具體地，本發明涉及一種抗腫瘤融合蛋白及其在抗腫瘤中的應用。更具體地，本發明還涉及編碼所述抗腫瘤融合蛋白的DNA序列，含有所述DNA序列的載體，含有所述載體的宿主細胞，生產所述抗腫瘤融合蛋白的方法，含有抗腫瘤融合蛋白的藥物組合物，以及所述抗腫瘤融合蛋白在腫瘤治療方面的應用。

背景技術

免疫毒素用于抑制癌細胞生長或抗腫瘤治療方面的研究已經有很長時間的歷史。早期的免疫毒素大多采用植物毒素作為彈頭藥物，由于過敏原性問題以及生成的免疫毒素抗腫瘤活性較低，目前已很少采用。目前在臨床上成功應用的免疫毒素多由細菌毒蛋白(如白喉毒素或綠膿桿菌外毒素)構建，這些免疫毒素已用于白血病，淋巴肉瘤及腦瘤等的治療上。然而，由于細菌毒蛋白很高的免疫原性的限制，在采用全身性用藥治療腫瘤時，病人體內會很快產生對免疫毒素的中和抗體，嚴重削弱其抗腫瘤活性。因此，迄今免疫毒素仍然不能在臨床上廣泛應用于許多實體瘤的治療。。

與此同時，幾十年來一直有人試圖用RNase治療腫瘤。由于腫瘤細胞內固有的RNase抑制蛋白的存在，許多RNase在細胞內的抗腫瘤活性非常低，無法成為實用的抗腫瘤藥物。直到兩棲類RNase的酶活性被發現不受哺乳動物細胞內固有的RNase抑制蛋白的抑制，對腫瘤細胞的生長具很強的抑制活性，而且免疫原性很低，用RNase或其衍生物治療腫瘤的課題才重新活躍起來。豹蛙卵或早期胚胎中含有一系列強烈抑制腫瘤的RNases，其中Onconase已被應用于惡性間皮細胞瘤的治療，并被證明具很低的免疫原性。與其同源的Amphinase和Onconase一樣，具廣譜的抗腫瘤活性。腫瘤轉化因子TGFα是一種與EGF結構相似并共享其受體EGFR的多肽，由其與細菌毒蛋白構建的免疫毒素已在腦瘤治療中開始臨床試驗。但由于很高免疫原性以及對正常肝細胞具一定毒性，在其他實體腫瘤的治療上尚有待改進。

發明內容

本發明的目的在于提供一種抗腫瘤融合蛋白及其在抗腫瘤中的應用。

本發明的另一目的在于提供編碼所述抗腫瘤融合蛋白的DNA、含有所述DNA序列的載體以及含有所述載體的宿主細胞。

本發明的另一目的在于提供生產所述抗腫瘤融合蛋白的方法以及含有抗腫瘤融合蛋白的藥物組合物。

在本發明的第一方面，提供了一種抗腫瘤融合蛋白，所述的抗腫瘤融合蛋白具有式Ia或Ib所述結構：

D-A-B-C (Ia)

D-C-B-A (Ib)

其中，

A為Amphinase蛋白元件；

B任選的連接肽元件；

C為TGFα蛋白元件或EGF蛋白元件；

D為任選的信號肽和/或前導肽序列；

“-”表示連接上述各元件的肽鍵。

在另一優選例中，所述的Amphinase蛋白來源于兩棲動物，較佳地來源于豹蛙。

在另一優選例中，所述的Amphinase蛋白包括野生型和突變型。

在另一優選例中，所述的Amphinase蛋白包括全長的、成熟形式的Amphinase，或其活性片段。