[發明專利]一種檢測T?2毒素的熒光免疫層析試紙

有效

• 申請號: 201610415407.X
• 申請日: 2016-06-14
• 公開（公告）號: CN106018794B
• 公開（公告）日: 2017-08-04
• 發明（設計）人: 職愛民;賈國超;張培蕾;李鎂娟;王自良;宋蓮軍;邱國慶
• 申請（專利權）人: 焦作百奧泰科生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/533;G01N33/543
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙)41122
• 代理人: 張愛軍

技術領域

本發明涉及一種免疫層析試紙，特別是涉及一種檢測T-2毒素的熒光免疫層析試紙。

背景技術

T-2毒素(T-2toxin，稱T-2)是單端孢霉烯族毒素之一，主要產生菌是鐮孢菌屬，如擬枝孢鐮刀菌(Fusariumsporotrich-oides)、枝孢鐮刀菌(Fusariumspor otrichiella)等。T-2毒素作為一種常見的真菌毒素，在自然界中廣泛存在，主要污染小麥、大麥、玉米等糧食作物及其制品，對人類健康及畜牧業構成了較大危害。T-2毒素可引起機體過氧化損傷，動物實驗表明，其毒性因使用劑量分為急性、亞急性和慢性。T-2毒素還具有致畸性和弱的致癌性，但不具有致突變性。T-2毒素中毒后的一般臨床癥狀為厭食、嘔吐、腹瀉、生長停滯、繁殖和神經機能障礙等。此外，T-2毒素可能還與我國某些地區大骨節病、食管癌和克山病的高發病率有關。1997年聯合國糧農組織(FAQ)和世界衛生組織(WHO)在日內瓦召開的聯席會議上，把T-2毒素同黃曲霉毒素一起作為自然存在的最危險的食品污染源。因此針對T-2開展有效的快速檢測很有意義。目前，用于T-2的檢測方法主要有生物鑒定法、化學分析法、儀器分析法和免疫分析法4大類。生物鑒定法的優點是待檢樣品不需很純，缺點是靈敏度低、實驗周期較長?；瘜W分析法的優點是經濟實用，但不能準確定量，且分析結果的可重復性和再現性差。儀器分析法具有高分離、高檢測效能及快速分析能力等優勢，但對樣品的前處理要求高，對操作人員技術要求高，且儀器設備價格昂貴，不適于快速檢測。免疫分析法操作簡單，成本低，而且具有較好的準確性和靈敏性，同時能進行定性和半定量或一定定量的檢測，適合于對大量樣品的篩查，是目前優先發展的檢測技術。

未修飾的氧化石墨烯表現出很弱的熒光，在紫外光照射下用肉眼基本上觀察不到熒光。這是由于氧化石墨烯納米片表面有很多含氧基團，例如納米片表面上的環氧鍵和羥基，納米片側面的羧基，這些基團通常能誘導電子-空穴對的非輻射復合，從而導致氧化石墨烯的熒光很弱。經過正丁胺修飾以后，氧化石墨烯納米片表面的環氧鍵和羧基都被反應掉，這將極大地降低其非輻射復合能力。因此修飾后，氧化石墨烯表現出很強的熒光可作為新型標記物在生物檢測領域應用。雖然膠體金試紙在此方面應用較廣，但其不能做到定量檢測，作為更敏感、穩定、靈活、安全的氧化石墨烯熒光層析試紙的研究，是膠體金免疫檢測技術的有力補充，丞待加強該方面的研究和探討。

上轉換熒光納米顆粒經過表面修飾與活化后，作為新型標記物在生物檢測等領域進行應用。因其獨特的物理結構和光學特性，使上轉換熒光免疫試紙法與理化檢測與微生物檢測技術相比，具有靈敏度高，操作過程簡單，成本低及能進行大批量現場檢測的特點；與膠體金試紙相比，具備定量檢測的特色，作為更敏感、穩定、靈活、安全的UPT-LF的研究，是膠體金免疫檢測技術的有力補充。但是目前上轉換熒光材料的制備和試紙的研究仍存在發光效率不夠，熒光材料種類少等缺陷，丞待加強該方面的研究和探討。

下轉換熒光納米顆粒具有高靈敏度，是一種完全惰性的無機發光材料，具有獨特物理結構和光學特性，可作為新型標記物應用在生物檢測領域。將其與生物學、免疫學、材料學相結合而開發的用于T-2快速檢測的下轉換熒光納米顆粒標記免疫層析方法，在靈敏、穩定、靈活方面顯示了優異的特性，是膠體金免疫檢測技術的有利補充，亟待加強該方面的研究和探討。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種檢測T-2毒素的熒光免疫層析試紙，該試紙具有特異、靈敏、快速、簡便等特點，能定量檢測食品、飼料、中草藥中的T-2毒素。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：

一種檢測T-2毒素的熒光免疫層析試紙，包括支撐體和固定在支撐體上的吸附層，吸附層從測試端開始依次為吸附纖維層、熒光抗體纖維層、纖維素膜層及吸水材料層，所述的纖維素膜層上設有用偶聯T-2的載體蛋白溶液印制的隱形檢測印跡和用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗體溶液印制的隱形對照印跡；所述的熒光抗體纖維層采用吸附熒光抗體的玻璃纖維棉制成，熒光抗體為氧化石墨烯熒光納米材料、NaYF₄:Yb,Tm納米顆粒或NaGd(WO₄)₂：Eu³⁺納米顆粒標記的T-2單克隆抗體或者多克隆抗體。

所述的支撐體包括設置在吸附層底面的底層和設置在吸附層頂面的面層。