[發(fā)明專利]一種檢測(cè)嘔吐毒素的熒光免疫層析試紙

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610415312.8
• 申請(qǐng)日: 2016-06-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105866419B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 職愛(ài)民;聶卉;李建新;閔玉濤;程麗英;張小梅;孫浩冉;郭林;楊聯(lián)芝;李靖靖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中州大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/558;G01N21/64
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務(wù)所(普通合伙)41122
• 代理人: 張愛(ài)軍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種免疫層析試紙，特別是涉及一種檢測(cè)嘔吐毒素的熒光免疫層析試紙。

背景技術(shù)

嘔吐毒素(Vomitoxin，稱DON)主要是由禾谷鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、串珠鐮刀菌、磚紅鐮刀菌、菌雪腐鐮刀菌等產(chǎn)生的毒素，該毒素是污染小麥、燕麥、玉米、大麥等糧食(飼料)及其制品的最廣泛、最常見(jiàn)真菌毒素。目前，全球范圍內(nèi)的糧食和飼料均受其污染，嚴(yán)重危害了人和動(dòng)物的健康。

嘔吐毒素主要作用于增殖活躍的細(xì)胞組織，如淋巴細(xì)胞、粘膜上皮、骨髓和肝等，淋巴細(xì)胞的損害最為嚴(yán)重，抑制細(xì)胞蛋白質(zhì)及的合成，干擾動(dòng)物能量和脂肪代謝，對(duì)生物膜的功能和多種酶活有明顯的作用，可引起動(dòng)物體的脂質(zhì)過(guò)氧化損傷。聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織年聯(lián)合召開(kāi)的第三次添加劑和污染物會(huì)議上，嘔吐毒素被定為最危險(xiǎn)的自然發(fā)生污染物，被列入國(guó)際研究的優(yōu)先地位，嚴(yán)重危害人畜的安全。因此，迫切需要找到一種有效的霉菌毒素脫毒措施。目前，用于DON的檢測(cè)方法主要有生物鑒定法、化學(xué)分析法、儀器分析法和免疫分析法4大類。生物鑒定法的優(yōu)點(diǎn)是待檢樣品不需很純，缺點(diǎn)是靈敏度低、實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)?；瘜W(xué)分析法的有點(diǎn)是經(jīng)濟(jì)實(shí)用，但不能準(zhǔn)確定量，且分析結(jié)果的可重復(fù)性和再現(xiàn)性差。儀器分析法具有高分離、高檢測(cè)效能及快速分析能力等優(yōu)勢(shì)，但對(duì)樣品的前處理要求高，對(duì)操作人員技術(shù)要求高，且儀器設(shè)備價(jià)格昂貴，不適于快速檢測(cè)。免疫分析法操作簡(jiǎn)單，成本低，而且具有較好的準(zhǔn)確性和靈敏性，同時(shí)能進(jìn)行定性和半定量或一定定量的檢測(cè)，適合于對(duì)大量樣品的篩查，是目前優(yōu)先發(fā)展的檢測(cè)技術(shù)。

未修飾的氧化石墨烯表現(xiàn)出很弱的熒光，在紫外光照射下用肉眼基本上觀察不到熒光。這是由于氧化石墨烯納米片表面有很多含氧基團(tuán)，例如納米片表面上的環(huán)氧鍵和羥基，納米片側(cè)面的羧基，這些基團(tuán)通常能誘導(dǎo)電子-空穴對(duì)的非輻射復(fù)合，從而導(dǎo)致氧化石墨烯的熒光很弱。經(jīng)過(guò)正丁胺修飾以后，氧化石墨烯納米片表面的環(huán)氧鍵和羧基都被反應(yīng)掉，這將極大地降低其非輻射復(fù)合能力。因此修飾后，氧化石墨烯表現(xiàn)出很強(qiáng)的熒光可作為新型標(biāo)記物在生物檢測(cè)領(lǐng)域應(yīng)用。雖然膠體金試紙?jiān)诖朔矫鎽?yīng)用較廣，但其不能做到定量檢測(cè)，作為更敏感、穩(wěn)定、靈活、安全的氧化石墨烯熒光層析試紙的研究，是膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)的有力補(bǔ)充。

上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒經(jīng)過(guò)表面修飾與活化后，作為新型標(biāo)記物在生物檢測(cè)等領(lǐng)域進(jìn)行應(yīng)用。因其獨(dú)特的物理結(jié)構(gòu)和光學(xué)特性，使上轉(zhuǎn)換熒光免疫試紙法與理化檢測(cè)與微生物檢測(cè)技術(shù)相比，具有靈敏度高，操作過(guò)程簡(jiǎn)單，成本低及能進(jìn)行大批量現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的特點(diǎn)；與膠體金試紙相比，具備定量檢測(cè)的特色，作為更敏感、穩(wěn)定、靈活、安全的UPT-LF的研究，是膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)的有力補(bǔ)充。但是目前上轉(zhuǎn)換熒光材料的制備和試紙的研究仍存在發(fā)光效率不夠，熒光材料種類少等缺陷，丞待加強(qiáng)該方面的研究和探討。

下轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒具有高靈敏度，是一種完全惰性的無(wú)機(jī)發(fā)光材料，具有獨(dú)特物理結(jié)構(gòu)和光學(xué)特性，可作為新型標(biāo)記物應(yīng)用在生物檢測(cè)領(lǐng)域。將其與生物學(xué)、免疫學(xué)、材料學(xué)相結(jié)合而開(kāi)發(fā)的用于DON快速檢測(cè)的下轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒標(biāo)記免疫層析方法，在靈敏、穩(wěn)定、靈活方面顯示了優(yōu)異的特性，是膠體金免疫檢測(cè)技術(shù)的有利補(bǔ)充。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種檢測(cè)嘔吐毒素的熒光免疫層析試紙，該試紙具有特異、靈敏、快速、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，能定量檢測(cè)食品、飼料、中草藥中的嘔吐毒素。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種檢測(cè)嘔吐毒素的熒光免疫層析試紙，包括支撐體和固定在支撐體上的吸附層，吸附層從測(cè)試端開(kāi)始依次為吸附纖維層、熒光抗體纖維層、纖維素膜層及吸水材料層，所述的纖維素膜層上設(shè)有用偶聯(lián)DON的載體蛋白溶液印制的隱形檢測(cè)印跡和用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗體溶液印制的隱形對(duì)照印跡；所述的熒光抗體纖維層采用吸附熒光抗體的玻璃纖維棉制成，熒光抗體為氧化石墨烯熒光納米材料、NaYF₄:Yb,Tm納米顆?；騈aGd(WO₄)₂：Eu³⁺納米顆粒標(biāo)記的DON單克隆抗體或者多克隆抗體。

所述的支撐體包括設(shè)置在吸附層底面的底層和設(shè)置在吸附層頂面的面層。

所述的支撐體包括透明的中空管體，吸附層填充在中空管體內(nèi)部，吸附層從測(cè)試端開(kāi)始依次為吸附纖維層、熒光抗體纖維層、纖維素膜層及吸水材料層。