[發(fā)明專利]一種復(fù)方丹參滴丸提取物的氫核磁共振檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610414251.3
• 申請(qǐng)日: 2016-06-13
• 公開（公告）號(hào): CN107490594A
• 公開（公告）日: 2017-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 褚揚(yáng);姜苗苗;馬曉慧;王躍飛;李偉;孫鶴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天士力制藥集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N24/08
• 分類號(hào): G01N24/08
• 代理公司: 北京華科聯(lián)合專利事務(wù)所(普通合伙)11130
• 代理人: 王為

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明提供一種基于氫核磁共振技術(shù)的復(fù)方丹參滴丸提取物中主要成分的定量分析方法，所述分析方法可以鑒定出提取物中的20個(gè)化合物，其中酚酸類化合物6種，皂苷類3種，糖類4種，氨基酸類3種，有機(jī)酸類4種，同時(shí)，可以測(cè)定其中的人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸和原兒茶醛6種主要成分的含量，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)復(fù)方丹參滴丸提取物的全面、快速的質(zhì)量評(píng)估。

背景技術(shù)

建立嚴(yán)格的中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和創(chuàng)建現(xiàn)代中藥工業(yè)生產(chǎn)質(zhì)量控制技術(shù)，確保中藥產(chǎn)品的安全、有效和穩(wěn)定，是中藥現(xiàn)代化研究領(lǐng)域的前沿課題，也是我國(guó)醫(yī)藥工業(yè)面臨的重大科技創(chuàng)新任務(wù)。因此，為更加全面、快速、準(zhǔn)確地反映生產(chǎn)過(guò)程中復(fù)方丹參滴丸的整體質(zhì)量狀況，有必要采用核磁共振(NMR)技術(shù)對(duì)現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)做進(jìn)一步升級(jí)，以提高中藥產(chǎn)品生產(chǎn)中的質(zhì)量控制水平，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。核磁共振，是指核磁矩不為零的原子核，在外磁場(chǎng)的作用下，核自旋能級(jí)發(fā)生塞曼分裂，共振吸收某一特定頻率的射頻輻射的物理過(guò)程。目前，日本藥典已收錄NMR分析方法用于中藥材、漢方藥物制劑的質(zhì)量評(píng)估。

為更加全面、快速、準(zhǔn)確地反映生產(chǎn)過(guò)程中復(fù)方丹參提取物(浸膏)的整體質(zhì)量狀況，本發(fā)明首次采用定量氫核磁(qHNMR)技術(shù)建立了用于復(fù)方丹參滴丸生產(chǎn)質(zhì)量控制的非色譜定量分析方法，既可進(jìn)行產(chǎn)品中間體的“宏觀定性”，還可對(duì)其中主要成分—丹參素、原兒茶醛和丹酚酸B進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析，以期提高產(chǎn)品生產(chǎn)中的質(zhì)量控制水平，確保產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。

定量氫核磁共振法(quantitative 1H nuclear magnetic resonance，qHNMR)，即采用氫核磁共振技術(shù)對(duì)化合物進(jìn)行定量分析的一種方法。

復(fù)方丹參滴丸是由丹參、三七、冰片3味中藥制成，目前市場(chǎng)上有售，市售復(fù)方丹參滴丸說(shuō)明書的主要內(nèi)容如下：

【功能主治】活血化瘀，理氣止痛。用于氣滯血瘀所致的胸痹、癥見胸悶、心前區(qū)刺痛冠心病心絞痛見上述證候者。

【主要成分】復(fù)方丹參滴丸主要成分：丹參、三七、冰片。

【包裝規(guī)格】薄膜衣滴丸每丸重27mg，180丸/瓶。

【用法用量】口服或舌下含服，一次10丸，一日3次，4周為一個(gè)療程；或遵醫(yī)囑。

有關(guān)文獻(xiàn)中也公開了其制備方法如：

配方：丹參82.87％，三七16.21％，冰片0.92％。

制備方法：

⑴丹參、三七用8倍重量的水煮沸提取2次，第一次2小時(shí)，第二次1小時(shí)，混合提取液。

⑵提取液過(guò)濾濃縮。

⑶以提取物和冰片一起作為藥物活性成分，基質(zhì)為聚乙二醇，投料比為：提取物藥物：基質(zhì)＝1：5.5，加入冰片，液體石蠟為冷凝劑，藥物溫度90℃，化料時(shí)間1.5小時(shí)，冷凝液溫度1℃，滴距7cm，滴速每分鐘35滴制備成滴丸。

復(fù)方丹參滴丸在制備過(guò)程中需要制備丹參，三七的提取物，為了對(duì)丹參，三七的提取物進(jìn)行質(zhì)量控制，需要尋找有效，快速，準(zhǔn)確的鑒定方法，本發(fā)明對(duì)此進(jìn)行了研究，并找到一種方法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，所述方法可以最大限度的達(dá)到上述要求為控制藥品質(zhì)量提供依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種中藥復(fù)方丹參滴丸提取物的氫核磁共振檢測(cè)方法，所述方法包括如下步驟：

步驟1，工作液的制備

稱取內(nèi)標(biāo)物3-(三甲基甲硅烷)丙二酸-d4鈉鹽，以氘代甲醇溶液溶解制成工作液；

步驟2，標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

稱取丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品用氘代甲醇溶液溶解制成標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

步驟3，供試品溶液的制備

稱取復(fù)方丹參滴丸提取物干粉，加入工作液，經(jīng)過(guò)提取分離得到供試品溶液；

步驟4，測(cè)定

將標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液注入超導(dǎo)核磁共振波譜儀，得到核磁共振波譜圖；

步驟5，根據(jù)所得核磁共振波譜圖中與丹參素、丹酚酸B、迷迭香酸、原兒茶醛、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對(duì)應(yīng)的質(zhì)子峰峰面積，計(jì)算各組分的含量；

其中，步驟4所述超導(dǎo)核磁共振波譜儀設(shè)定的氫核磁測(cè)試條件如下：

采用25-35°脈沖序列采集樣品溶液的1H NMR圖譜,測(cè)定溫度290-310K，觀測(cè)頻率590-610MHz，譜寬12330-12340Hz，采樣數(shù)據(jù)點(diǎn)65530-65540，掃描次數(shù)8-64次，延遲時(shí)間0.9-1.1s，采集時(shí)間2.6560-2.6570s，接受增益120-180，用TSP信號(hào)定標(biāo)；