[發(fā)明專利]結(jié)直腸癌組織溯源CTC分型鑒定試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610408196.7
• 申請(qǐng)日: 2016-06-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107475358A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉蘇燕;吳詩(shī)揚(yáng);董艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 益善生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司44224
• 代理人: 萬(wàn)志香

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種結(jié)直腸癌組織溯源CTC分型鑒定試劑盒。

背景技術(shù)

原發(fā)灶不明的腫瘤(carcinoma of unknown primary,CUP)是指在治療前評(píng)估中，病理證實(shí)為轉(zhuǎn)移性腫瘤，但是經(jīng)過(guò)詳細(xì)的病史和體檢，實(shí)驗(yàn)室檢查和影像學(xué)檢查，均不能確定其原發(fā)部位的腫瘤。早期播散，侵襲性強(qiáng)，轉(zhuǎn)移方式不可預(yù)測(cè)是這類腫瘤的特征性表現(xiàn)。

原發(fā)灶不明轉(zhuǎn)移癌約占癌癥病人中的5-10％，病理來(lái)源腺癌占40％，未分化癌占40％，鱗癌占13％，其它類型的腫瘤占7％。由于病灶較小、部位隱匿或位于黏膜下等原因而不易發(fā)現(xiàn)；且腫瘤的生物學(xué)行為又較惡劣，較早發(fā)生轉(zhuǎn)移，給臨床醫(yī)生帶來(lái)了診斷和治療方面非常大的難題。因?yàn)楹罄m(xù)的治療，不管是手術(shù)還是放療、化療，原發(fā)灶不同，治療方式也會(huì)不同。轉(zhuǎn)移灶雖然在別的器官上，但是它的生物學(xué)行為是和原發(fā)灶的基本相同的，所以治療方法也要根據(jù)原發(fā)灶的不同而異。因此，確定原發(fā)病灶尤為重要，只有找到原發(fā)病灶，標(biāo)本兼治，臨床治愈率才能改善。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells,CTCs)是因自發(fā)或診療操作從實(shí)體腫瘤病灶(原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶)脫落，進(jìn)入外周血中的各類腫瘤細(xì)胞的統(tǒng)稱，目前認(rèn)為CTCs可能是腫瘤轉(zhuǎn)移的早期階段。腫瘤細(xì)胞侵入到原發(fā)病灶的周圍組織中，進(jìn)入血液和淋巴管系統(tǒng)，形成CTCs，并轉(zhuǎn)運(yùn)到遠(yuǎn)端組織，再滲出，適應(yīng)新的微環(huán)境，最終“播種”、“增殖”、“定植”、形成轉(zhuǎn)移灶。腫瘤細(xì)胞在進(jìn)入外周血循環(huán)的過(guò)程中可能發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變(ETM，Epithelial-mesenchymal Transition)，EMT過(guò)程中，除了細(xì)胞形態(tài)和移動(dòng)性發(fā)生改變外，細(xì)胞基因表達(dá)譜特別是上皮、間質(zhì)分子標(biāo)志物及其轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)也發(fā)生改變，發(fā)生EMT的腫瘤細(xì)胞間黏附改變，遷移和侵襲能力增強(qiáng)。根據(jù)CTCs抗原標(biāo)志物的差異，目前CTCs主要可分為上皮標(biāo)志物陽(yáng)性表型(簡(jiǎn)稱上皮細(xì)胞型)、間質(zhì)標(biāo)志物陽(yáng)性表型(簡(jiǎn)稱間質(zhì)細(xì)胞型)和上皮與間質(zhì)混合表型(簡(jiǎn)稱上皮-間質(zhì)細(xì)胞型)等。不同類型CTCs具有不同的遷移和侵襲能力。因此組織溯源CTC的分型和檢測(cè)，對(duì)于原發(fā)灶不明的腫瘤患者原發(fā)病灶的確定、治療方案設(shè)計(jì)以及預(yù)后評(píng)估具有重要的意義。

臨床上腫瘤治療的關(guān)鍵是早期診斷和準(zhǔn)確分期，主要措施是去除原發(fā)病灶及阻斷和控制轉(zhuǎn)移病灶，所以CUP的原發(fā)灶尋找是臨床醫(yī)生面臨的棘手問(wèn)題之一，極大程度的限制了醫(yī)生對(duì)疾病的診斷和治療。由于原發(fā)病灶不明確，往往不能采取針對(duì)性的治療方案，造成治療效果不佳和病人預(yù)后不良。然而，目前傳統(tǒng)的診斷方法，包括CT掃描、PET-CT檢查和血清腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)等往往費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，需要拉網(wǎng)式篩查，而其檢測(cè)率僅有20-50％。因此，繼續(xù)一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好的檢測(cè)試劑盒以及檢測(cè)方法，用于腫瘤原發(fā)灶的確定，幫助醫(yī)生對(duì)患者的診斷和治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好的結(jié)直腸癌組織溯源CTC分型鑒定試劑盒，用于判斷患者原發(fā)病灶是否為結(jié)直腸癌。

實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下。

一種結(jié)直腸癌組織溯源CTC分型鑒定試劑盒，包括針對(duì)檢測(cè)目標(biāo)基因mRNA的捕獲探針以及信號(hào)放大系統(tǒng)，所述目標(biāo)基因包括有結(jié)直腸癌特異性基因、上皮細(xì)胞標(biāo)志基因、和間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志基因，所述結(jié)直腸癌特異性基因選自CDX2、SATB2、CK20、CDH17中至少兩種；所述上皮細(xì)胞標(biāo)志基因選自EpCAM、CDH1、CK17、CK19中的至少兩種；所述間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志基因選自SNAI1、CTNNB1、FN1、TWIST1中至少兩種，所述信號(hào)放大系統(tǒng)包括末端修飾有熒光基團(tuán)的擴(kuò)增探針，或包括有擴(kuò)增探針和末端修飾有熒光基團(tuán)的標(biāo)記探針，不同種類目標(biāo)基因的熒光基團(tuán)互不相同；其中，

所述捕獲探針用于連接目標(biāo)基因mRNA與擴(kuò)增探針，每條捕獲探針從5’端到3’端的堿基組成依次為：可與待檢測(cè)的目標(biāo)基因mRNA結(jié)合的特異性序列P1、間隔臂序列、P2序列，所述P2序列為不存在發(fā)夾結(jié)構(gòu)、探針內(nèi)部和探針間不形成二聚體、不存在錯(cuò)配，與P1、P4和目標(biāo)基因mRNA之間均不存在特異性結(jié)合的序列，針對(duì)同一類別目標(biāo)基因mRNA的捕獲探針的P2序列相同；