[發明專利]CAH相關基因靶向二代測序檢測方法在審
| 申請號： | 201610407878.6 | 申請日： | 2016-06-12 |
| 公開（公告）號： | CN107488704A | 公開（公告）日： | 2017-12-19 |
| 發明（設計）人： | 寧光;葉蕾;趙萸;楊祖威;謝曉雁;戴蒙;孫首悅;王衛慶 | 申請（專利權）人： | 上海市內分泌代謝病研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海一平知識產權代理有限公司31266 | 代理人： | 陳詳,陸鳳 |
| 地址： | 200025 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | cah 相關 基因 靶向 二代 檢測 方法 | ||
1.一種引物集，其特征在于，所述引物集包括用于特異性擴增CYP21A2的第一引物對，
其中，所述的CYP21A2的第一引物對包括：
第一上游引物：序列如SEQ ID NO:1所示；和
第一下游引物：序列如SEQ ID NO:2所示。
2.如權利要求1所述的引物集，其特征在于，所述的引物集還包括選自下列(a)－(i)組中的一個或多個引物對：
(a)用于擴增CYP21A2外顯子或內含子的引物對；
(b)用于擴增StAR外顯子或內含子的引物對；
(c)用于擴增CYP11A1外顯子或內含子的引物對；
(d)用于擴增HSD3B2外顯子或內含子的引物對；
(e)用于擴增CYP11B1外顯子或內含子的引物對；
(f)用于擴增CYP11B2外顯子或內含子的引物對；
(g)用于擴增POR外顯子或內含子的引物對；
(h)用于擴增CYP17A1外顯子或內含子的引物對；
(i)用于擴增H6PD外顯子或內含子的引物對。
3.如權利要求1所述的引物集，其特征在于，所述的引物集還包括以下pool引物子集：
pool引物子集p1，所述的引物子集p1用于進行針對CYP21A2基因的多重PCR(pool1引物)；
pool引物子集p2，所述的引物子集p2用于進行針對CYP21A2基因的多重PCR(pool2引物)；
pool引物子集p3，所述的引物子集p3用于進行針對StAR,CYP11A1,HSD3B2,CYP11B1,CYP11B2,POR,CYP17A1,H6PD基因的多重PCR(pool3引物)；和
pool引物子集p4，所述的引物子集p4用于進行針對StAR,CYP11A1,HSD3B2,CYP11B1,CYP11B2,POR,CYP17A1,H6PD基因的多重PCR(pool4引物)。
4.如權利要求3所述的引物集，其特征在于，pool引物子集p1、p2、p3和p4中包含的引物對所對應的擴增片段的長度為100-300bp，較佳地為150-250bp，更佳地為180-220bp。
5.如權利要求1所述的引物集，其特征在于，所述的第一上游引物和第一下游引物特異性擴增對應于CYP21A2基因的擴增產物，但不擴增對應于CYP21A1P基因的擴增產物。
6.一種PCR擴增體系，其特征在于，所述的擴增體系包括：用于擴增的緩沖體系以及位于所述體系中的權利要求1所述的引物集。
7.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括一個或多個容器，和位于所述容器中的如權利要求1所述的引物集。
8.一種確定CAH相關基因的突變情況的檢測方法，其中，CAH相關基因包括：CYP21A2基因、StAR基因、CYP11A1基因、HSD3B2基因、CYP21A2基因、CYP11B1基因、CYP11B2基因、POR基因、CYP17A1基因、和H6PD基因，其特征在于，
所述方法包括步驟：
(a)提供一待測的基因組DNA樣品；
(b)利用特異性擴增CYP21A2的第一引物對，對待測的基因組DNA樣品進行PCR擴增，從而獲得含第一擴增產物的第一混合物；
其中，所述的CYP21A2的第一引物對包括：
第一上游引物：序列如SEQ ID NO:1所示；和
第一下游引物：序列如SEQ ID NO:2所示；
(c)以第一擴增產物為模板，對CYP21A2基因進行檢測，從而確定CYP21A2基因的突變情況；以及以待測的基因組DNA為模板，對除CYP21A2基因之外的其它CAH相關基因進行檢測，從而確定CAH相關基因的突變情況。
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，在步驟(c)中，所述的檢測包括進行多重PCR，并進行測序分析。
10.一種確定CYP21A2基因的突變情況的檢測方法，其特征在于，包括步驟：
(a)提供一待測DNA樣品；
(b)利用特異性擴增CYP21A2的第一引物對，對檢測樣品進行PCR擴增，從而獲得第一混合物；
其中，所述的CYP21A2的第一引物對包括：
第一上游引物：序列如SEQ ID NO:1所示；和
第一下游引物：序列如SEQ ID NO:2所示；
(c)以第一混合物為模板進行多重PCR，從而獲得第二混合物；和
(d)對獲得的第二混合物進行檢測，從而獲得CYP21A2基因的突變情況。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于上海市內分泌代謝病研究所，未經上海市內分泌代謝病研究所許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201610407878.6/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
- 制備金雞納生物堿配體的縛酸劑
- 用Mg<sub>3</sub>N<sub>2</sub>和CaH<sub>2</sub>合成立方氮化硼的方法
- NiF<sub>2</sub>摻雜LiBH<sub>4</sub>-LiNH<sub>2</sub>-CaH<sub>2</sub>復合儲氫材料及其制備方法
- 一種基于CAH-2抗菌劑的聚四氟乙烯薄膜生產工藝
- CAH相關基因靶向二代測序檢測方法
- 一種來源于枯草桿菌ZXN4的細菌漆酶基因、細菌漆酶及其應用
- 一種裝配海藻酸鈣水凝膠CAH人工肌肉的澆鑄工藝方法
- 一種同時檢測CAH多種相關物質的方法和試劑盒
- 檢測CAH相關真假基因的方法
- 一種人工抗菌肽CAH、制備方法及其應用
