[發(fā)明專利]肺癌早期篩查試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610407654.5
• 申請日: 2016-06-08
• 公開（公告）號: CN107475355A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉蘇燕;吳詩揚(yáng);董艷
• 申請（專利權(quán)）人: 益善生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司44224
• 代理人: 萬志香

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)，具體的是涉及一種肺癌早期篩查試劑盒。

背景技術(shù)

肺癌是指源于支氣管粘膜上皮的惡性腫瘤，又稱為支氣管肺癌，其發(fā)病率和死亡率在惡性腫瘤中增長最快，是對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近50年來，許多國家都報道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌早期診斷率低，0期患者常無任何癥狀，確診時不到肺癌患者總數(shù)的0.6％；0期肺癌患者術(shù)后的5年生存率可達(dá)90％以上，Ia期肺癌患者術(shù)后5年生存率為60％，而II-IV期病人總的5年生存率僅為5％-40％。目前外科治療是對肺癌患者首選和最主要的治療方法，只有在病變早期得到診斷，早期治療，才能獲得較好的療效。因此，提高肺癌早期診斷率，“早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、早期治療”是降低肺癌死亡率的重要措施。然而，由于肺癌早期診斷檢測技術(shù)的限制，80％的肺癌患者在確診時已經(jīng)失去了手術(shù)治療的機(jī)會。

目前對于肺癌的早期診斷方法包括X射線、CT檢測、痰細(xì)胞學(xué)檢查等病理診斷方法以及其它生化指標(biāo)的檢測，這些檢測方法都屬于腫瘤形成后診斷。臨床研究早已證實，腫瘤團(tuán)塊一旦形成，癌細(xì)胞通過不同途徑遷移到其它部位克隆生長。雖然也有針對肺癌相關(guān)腫瘤基因的mRNA早期篩查技術(shù)，如RT-PCR、real-time PCR和熒光原位雜交等，但目前的檢測主要基于PCR反應(yīng)原理，具有易污染、假陽性率高等缺陷，而傳統(tǒng)的RNA熒光原位雜交本身具有信號靈敏度低的缺點(diǎn)。此外，缺乏特異性的早期篩查分子標(biāo)志物也是限制肺癌早期篩查的重要因素。因此，急需一種針對肺癌早期篩查的分子標(biāo)志物，以及特異性強(qiáng)、靈敏度高的檢測方法，能在基因的一級轉(zhuǎn)錄功能產(chǎn)物(mRNA水平)上做更精確的早期篩查和診斷。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種特異性強(qiáng)、靈敏度高的肺癌早期篩查試劑盒。

實現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下。

一種肺癌早期篩查試劑盒，包括針對檢測目標(biāo)基因mRNA的捕獲探針以及信號放大系統(tǒng)；所述目標(biāo)基因包括有肺癌篩查基因、非血源細(xì)胞相關(guān)基因，所述肺癌篩查基因選自TTF-1，LUNX，NSE，EGFR，P63，CEA中的至少兩種；所述非血源細(xì)胞相關(guān)基因選自CK7，CK19，hTERT，VIM，PIM-1，Survivin中至少兩種；所述信號放大系統(tǒng)包括有末端修飾有熒光基團(tuán)的擴(kuò)增探針，或包括有擴(kuò)增探針和末端修飾有熒光基團(tuán)的標(biāo)記探針，不同種類目標(biāo)基因的熒光基團(tuán)互不相同；其中，

所述捕獲探針用于連接目標(biāo)基因mRNA與擴(kuò)增探針，每條捕獲探針從5’端到3’端的堿基組成依次為：能與待檢測的目標(biāo)基因mRNA結(jié)合的特異性序列P1、間隔臂序列、P2序列，所述P2序列為不存在發(fā)夾結(jié)構(gòu)，探針內(nèi)部和探針間不形成二聚體、不存在錯配，與P1、P4和目標(biāo)基因mRNA之間均不存在特異性結(jié)合的序列，針對同一類別目標(biāo)基因mRNA的捕獲探針的P2序列相同；

所述擴(kuò)增探針連接捕獲探針與熒光基團(tuán)，或連接捕獲探針與標(biāo)記探針，每條擴(kuò)增探針從5’端到3’端的堿基組成依次為：能與相應(yīng)捕獲探針的P2序列互補(bǔ)配對的P3序列、間隔臂序列、P4序列；所述P4序列為不存在發(fā)夾結(jié)構(gòu)，探針內(nèi)部和探針間不形成二聚體、不存在錯配、與P1、P2、P3和總mRNA之間均不存在特異性結(jié)合的序列；

所述標(biāo)記探針連接擴(kuò)增探針與熒光基團(tuán)，每條標(biāo)記探針具有與相應(yīng)擴(kuò)增探針P4序列互補(bǔ)配對的P5序列，且末端修飾有熒光基團(tuán)，不同種類目標(biāo)基因的熒光基團(tuán)互不相同。

在其中一個實施例中，所述目標(biāo)基因還包括排除基因mRNA，所述排除基因選自CD45、CD34、CD105、CD144、CD146、VWF中至少兩種。