[發明專利]一種馬錢子苷元生物樣品的測定方法

有效

• 申請號: 201610405338.4
• 申請日: 2016-06-10
• 公開（公告）號: CN105806985B
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 張則平;張貴民;王現珍;許曉麗
• 申請（專利權）人: 魯南制藥集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種馬錢子苷元生物樣品的測定方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

(1)生物樣品處理：生物樣品采集后，立即與0.3％的甲酸生理鹽水混合，離心，取混合離心后的上層澄清液體作為待測液，在待測液中加入內標、甲醇，渦旋后離心，取上清液進行LC-MS/MS分析，所述的內標為環黃芪醇；

(2)采用超高效液相色譜法-電噴霧離子化串聯質譜(LC-MS/MS)法檢測馬錢子苷元在生物樣品中的濃度，LC-MS/MS法中液相系統條件為流動相：A相為0.1％甲酸水，B相為甲醇，梯度洗脫；0-1min 20％B，1-2min20％～95％B，2-3min 95％B，3-3.5min95％～20％B；色譜柱為Thermo Hypersil GOLD 50*2.1；流速：0.2mL/min；柱溫：30℃；樣品盤溫度：20℃；進樣量：3μL；質譜系統條件為：離子源：H-ESI；噴射電壓：3500V；鞘氣：30Arb；輔助氣：8Arb；尾吹氣：0Arb；離子傳輸毛細管溫度：325℃；氣化溫度：50℃。

2.如權利要求1所述的馬錢子苷元生物樣品的測定方法，其特征在于，生物樣品處理中的生物樣品包括血液、尿液、膽汁、臟器、糞便。

3.如權利要求2所述的馬錢子苷元生物樣品的測定方法，其特征在于，血液、尿液、膽汁采集后與等體積0.3％甲酸生理鹽水混合，離心后取上層澄清液體作為待測液；臟器、糞便取樣后立即用0.3％甲酸生理鹽水研磨，離心后取上層澄清液體作為待測液。

4.如權利要求1所述的馬錢子苷元生物樣品的測定方法，其特征在于，生物樣品處理時取50μL待測液，加入10μL內標工作液和140μL甲醇沉淀液，渦旋混勻，10000r/min離心10min，取上清液，進樣3μL進行LC-MS/MS分析。

5.如權利要求4所述的馬錢子苷元生物樣品的測定方法，其特征在于，所述的內標工作液為1.0μg/mL的環黃芪醇甲醇溶液。

6.如權利要求1所述的馬錢子苷元生物樣品的測定方法，其特征在于，馬錢子苷元的m/z母離子→子離子為229.1→179.104，碰撞能為11v，RF lens為109v；內標環黃芪醇的m/z母離子→子離子為491.4→143.2，碰撞能為9v，RF lens為105v。