[發明專利]微衛星不穩定性位點-BAT26位點的檢測引物、擴增體系及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201610403299.4
• 申請日: 2016-06-08
• 公開（公告）號: CN107475253B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 傅新暉;黃京林;陳志婷;林漢杰;王婧璇;王磊;汪建平
• 申請（專利權）人: 中山大學附屬第六醫院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6858
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 謝敏楠

本發明屬于生物醫藥領域，涉及微衛星不穩定性位點?BAT26位點的檢測引物、擴增體系及檢測試劑盒。該引物序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示。采用本發明的引物進行高分辨率熔解曲線法?HRM檢測，具有很高的靈敏度和特異性。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種檢測腫瘤細胞中微衛星穩定性的擴增體系及檢測試劑盒。

背景技術

結直腸癌(colorectal cancer，CRC)在世界范圍內的惡性腫瘤疾病當中，發病率高居第4位，是一種常見惡性腫瘤，死亡率高居第2位，嚴重威脅著人類的健康與生活。結直腸癌的發病過程所表現出的許多特性與某些遺傳學改變相關，為了使更多結腸癌患者得到更科學合理的治療，探索相關遺傳指標來判斷患者的預后和化療療效、指導患者的個體化治療一直是受推崇的主題。近年來，微衛星不穩定性(MSI)的相關臨床和基礎方面研究取得了較好的進展，對MSI狀態與CRC的關系有了更深入的認識。例如高度微衛星不穩定(MSI-H)的結直腸癌患者較低度微衛星不穩定(MSI-L)和微衛星穩定(MSS)的患者具有更好的預后。

目前，檢測微衛星不穩定性狀態的方法包括MMR蛋白免疫組化法、片段分析法、HRM法等。上述后兩種均屬于基于PCR技術的方法，其引物的選擇均是對檢測靈敏度有極其重要影響的因素。片段分析法是目前公認的金標準方法，但該方法成本較高，檢測時間較長，并且必須在價格昂貴的測序儀上進行分析。HRM法則具有快速、成本低、靈敏度高等優點，同時只需在熒光定量PCR儀上即可進行分析。但HRM法對引物設計的要求很高：引物既要有很好的特異性，又要求其擴增出的片段足夠短，才能對其突變樣本獲得較好的分辨能力。

BAT26位點是微衛星不穩定性檢測的重要位點之一，但目前對其進行HRM法檢測的研究很少，僅有一篇報導(Ramunas Janavicius，2010)曾嘗試使用HRM方法檢測結直腸癌標本中BAT25、BAT26兩個位點的檢測，但檢測例數不多，缺少大樣本的臨床驗證。

發明內容

本發明的目的在于提供一種針對微衛星不穩定性位點-BAT26位點進行HRM法檢測的引物/擴增體系/檢測試劑盒。

發明通過以下技術方案實現：

首先，發明提供了一種引物，其序列選自SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。

SEQ ID NO.1:TGCAGCAGTCAGAGCCCTTA

SEQ ID NO.2:GCTTCTTCAGTATATGTCAATGAAAACA

本發明提供了一種針對BAT26位點進行HRM法檢測的試劑盒，含有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示引物。

在該試劑盒中，各組分的用量配比如下(總體積20-25μL的擴增體系)：