[發(fā)明專利]一種血液糖化血紅蛋白熒光免疫檢測(cè)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610402104.4
• 申請(qǐng)日: 2016-06-09
• 公開（公告）號(hào): CN107490699A
• 公開（公告）日: 2017-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李亞星;劉鳳鳴;劉冰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 常州博聞迪醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/72
• 分類號(hào): G01N33/72;G01N33/577;G01N33/533
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫檢測(cè)分析技術(shù)領(lǐng)域，特別是指一種血液糖化血紅蛋白熒光免疫檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

糖化血紅蛋白（HbA1c）是血液葡萄糖通過非酶作用，經(jīng)細(xì)胞膜與紅細(xì)胞內(nèi)血紅蛋白-鏈頡氨酸結(jié)合形成的產(chǎn)物，其合成速率與紅細(xì)胞所處環(huán)境中糖的濃度成正比，是人體血液中紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白與血糖結(jié)合的產(chǎn)物。

血糖和血紅蛋白的結(jié)合生成糖化血紅蛋白是不可逆反應(yīng)，并與血糖濃度成正比，且保持120天左右。血糖是從食物中的碳水化合物分解而來的血液中的單糖,通常僅指葡萄糖，血糖測(cè)試結(jié)果反映的是即刻的血糖水平。所以糖化血紅蛋白較血糖測(cè)定更有臨床意義，被譽(yù)為糖尿病病情監(jiān)測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在臨床檢測(cè)中進(jìn)行日常檢測(cè)作為血糖控制的指標(biāo)。

目前臨床上測(cè)定糖化血紅蛋白的主要檢測(cè)方法有高效液相色譜﹑電泳法﹑親和層析法等。

離子交換高效液相色譜分析法，它是在經(jīng)典液相層析法基礎(chǔ)上，引進(jìn)了氣相層析的理論具有氣相層析的全部?jī)?yōu)點(diǎn)。測(cè)試前需要采用專用儀器對(duì)血樣中的血紅蛋白和糖化血紅蛋白進(jìn)行分離，測(cè)試時(shí)需使用大型色譜分析設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)，故檢測(cè)必須在醫(yī)院由專人進(jìn)行，難以滿足糖化血紅蛋白即時(shí)檢測(cè)的需求。

電泳法，相比于非糖化血紅蛋白，因糖化而變化的總電荷和糖化血紅蛋白的等電點(diǎn)變化是瓊脂糖凝膠或者pH梯度5.0～6.5的凝膠等電聚焦電泳分離的基礎(chǔ)。瓊脂糖凝膠電泳的血紅蛋白亞組分分辨率很小，而等電聚焦可以更好地使亞組分分離?？赡苡捎谠囼?yàn)的自動(dòng)化程度不足，重要性已經(jīng)下降。

親和層析法，將血樣本中的血紅蛋白加到層析柱后，所有的糖化血紅蛋白（HbA1和旁鏈糖化的血紅蛋白；總糖化血紅蛋白）與硼酸結(jié)合而非糖化血紅蛋白通過層析柱可被測(cè)量。在加入高濃度也包含順式-羥基的多羥基復(fù)合物，例如山梨醇后，糖化血紅蛋白與硼酸的結(jié)合被替換而從柱子上洗脫下來。親和層析法對(duì)經(jīng)翻譯以后修飾的血紅蛋白和病理血紅蛋白的影響相對(duì)不敏感。利用親和層析法，僅能測(cè)定總糖化血紅蛋白。廣泛使用的親和層析方法，也僅是用經(jīng)驗(yàn)算法從總糖化血紅蛋白值計(jì)算出“標(biāo)準(zhǔn)的HbA1c”，因此存在定量無法精準(zhǔn)的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種靈敏度高、準(zhǔn)確性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、能夠快速診斷糖化血紅蛋白的熒光免疫檢測(cè)方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用熒光免疫層析技術(shù)，具體的技術(shù)方案為：

（1）制備熒光免疫檢測(cè)試劑盒，其中包括標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)品的制備, 所述標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)品為不與血紅蛋白、抗血紅蛋白抗體、糖化血紅蛋白以及抗糖化血紅蛋白抗體發(fā)生免疫性結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)；

（2）將待檢測(cè)血液樣本放入熒光免疫檢測(cè)試劑盒，以標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)品作為參比品，與糖化血紅蛋白進(jìn)行免疫檢測(cè)反應(yīng)，讀取樣本糖化血紅蛋白的免疫檢測(cè)結(jié)果a以及糖化血紅蛋白對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)品免疫檢測(cè)結(jié)果b；

（3）將與步驟（2）中同一種待檢測(cè)血液樣本放入熒光免疫檢測(cè)試劑盒，以與步驟（2）中同一種標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)品作為參比品，與血紅蛋白進(jìn)行免疫檢測(cè)反應(yīng)，讀取樣本血紅蛋白的免疫檢測(cè)結(jié)果c以及血紅蛋白對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)品免疫檢測(cè)結(jié)果d；

（4）計(jì)算得出比值A(chǔ)=a/b，比值B=c/d；

（5）計(jì)算糖化血紅蛋白的含量=A/B。

進(jìn)一步地，所述檢測(cè)方法所用原料包括標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)品、抗血紅蛋白抗體、抗糖化血紅蛋白抗體、樣品墊、標(biāo)記墊、層析膜、吸水墊和底板。

進(jìn)一步地，所述標(biāo)準(zhǔn)比對(duì)品為兔IgG、驢IgG、馬IgG、羊IgG、鼠IgG的一種或兩種或兩種以上。

進(jìn)一步地，所述抗血紅蛋白抗體為抗血紅蛋白單克隆抗體和抗血紅蛋白多克隆抗體的一種或兩種。

進(jìn)一步地，所述抗糖化血紅蛋白抗體為抗糖化血紅蛋白單克隆抗體、抗糖化血紅蛋白多克隆抗體、抗血紅蛋白單克隆抗體、抗血紅蛋白多克隆抗體的一種或兩種或兩種以上。

進(jìn)一步地，所述載體為硝酸纖維素膜。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供了一種定量檢測(cè)糖化血紅蛋白的熒光免疫層析試劑盒，包括扣卡、熒光免疫層析試紙條和緩沖液。