[發(fā)明專利]一種用于培養(yǎng)人間充質(zhì)干細胞的低血清培養(yǎng)基

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610398249.1
• 申請日: 2016-06-07
• 公開（公告）號: CN107475184A
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊旅軍
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州美薩生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 汕頭市南粵專利商標事務所(特殊普通合伙)44301
• 代理人: 余飛峰

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及干細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種間充質(zhì)干細胞的低血清培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細胞【mesenchymal stem cells,MSC】是干細胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層，屬于多能干細胞，MSC最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調(diào)控和自我復制等特點而日益受到人們的關(guān)注。如間充質(zhì)干細胞在體內(nèi)或體外特定的誘導條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內(nèi)皮等多種組織細胞，連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復。

細胞培養(yǎng)在干細胞凍存中廣泛應用。在傳統(tǒng)培養(yǎng)過程中通常需要添加一定量的胎牛血清, 在實際應用中，血清的添加存在如下缺點：

（1) 干細胞對胎牛血清存在依賴性；

（2)血清易受病毒、支原體或其他病原體的污染；

（3）胎牛血清對干細胞特性和分化有不利影響；

（4) 對于規(guī)模化生產(chǎn)，大量血清的存在增加生產(chǎn)后期純化的難度，增加工藝流程、提高生產(chǎn)成本，回收率降低； 部分血清成分難以徹底去除，嚴重影響最終產(chǎn)品質(zhì)量，具有安全隱患。

當前也有一些公司開發(fā)的新一代無血清培養(yǎng)基，如Invitrogen 開發(fā)MSC SFM XenoFree 無血清培養(yǎng)基、加拿大stemcell 公司開發(fā)了MesenCultTM-XF Medium 無血清培養(yǎng)基、BD 公司開發(fā)的BDMOSAICTM Hmsc SF Medium 和CellGenix 開發(fā)的Serum-free MSC Medium 等。但這些培養(yǎng)基價格昂貴，在培養(yǎng)MSC 過程中都需要使用附屬產(chǎn)品進行細胞培養(yǎng)瓶的包被處理。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種增殖能力強、適合于臨床應用的間充質(zhì)干細胞的低血清培養(yǎng)基。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種用于培養(yǎng)人間充質(zhì)干細胞的低血清培養(yǎng)基，包括下列成分，以濃度計：

重組人胰島素： 1~100ug/ml；

堿性成纖維細胞生長因子： 1~50ng/ml；

人轉(zhuǎn)鐵蛋白： 1~50ug/ml；

亞硒酸： 1~80ug/ml；

絲氨酸： 1~300ug/ml；

氯化膽堿： 1~200ug/ml；

腺嘌呤： 1~60ug/ml；

單乙酰胺： 1~100ug/ml；

磷酰乙醇胺： 0.01~10mmol/ml；

三碘甲狀腺氨酸: 1~50pg/ml；

胎牛血清： 1~50ul/ml。

作為優(yōu)選，本發(fā)明所述的一種用于培養(yǎng)人間充質(zhì)干細胞的低血清培養(yǎng)基，包括下列成分，以濃度計：

重組人胰島素：1~50ug/ml；

堿性成纖維細胞生長因子： 1~20ng/ml；

人轉(zhuǎn)鐵蛋白：1~20ug/ml；

亞硒酸：1~30ug/ml；

絲氨酸：1~150ug/ml；

氯化膽堿：1~100ug/ml；

腺嘌呤：1~30ug/ml；

單乙酰胺：1~20ug/ml；

磷酰乙醇胺： 0.05~1mmol/ml；

三碘甲狀腺氨酸： 1~20pg/ml；

胎牛血清：1~30ul/ml。

更有選地，本發(fā)明所述的一種用于培養(yǎng)人間充質(zhì)干細胞的低血清培養(yǎng)基，包括下列成分，以濃度計：

重組人胰島素：5ug/ml；

堿性成纖維細胞生長因子：4ng/ml；

人轉(zhuǎn)鐵蛋白：5ug/ml；

亞硒酸：6.84ug/ml；

絲氨酸：105ug/ml；

氯化膽堿：89.3ug/ml；

腺嘌呤：12.2ug/ml；

單乙酰胺：14ug/ml；

磷酰乙醇胺：0.1mmol/ml；

三碘甲狀腺氨酸：13.46pg/ml

胎牛血清：20ul/ml。

優(yōu)選的，所述的一種用于培養(yǎng)人間充質(zhì)干細胞的低血清培養(yǎng)基，還包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為高糖DMEM 培養(yǎng)基。

優(yōu)選的，所述的一種用于培養(yǎng)人間充質(zhì)干細胞的低血清培養(yǎng)基在人脂肪間充質(zhì)干細胞和人臍帶間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)中的應用。

本發(fā)明的有益效果為：