[發(fā)明專利]忍冬藤中5?O?[4′?O?(β?D?吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎寧酸含量測定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610395262.1
• 申請日: 2016-06-03
• 公開（公告）號: CN105842371B
• 公開（公告）日: 2017-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林永強;郭東曉;徐麗華;汪冰;焦陽;劉新泳
• 申請（專利權(quán)）人: 山東大學(xué);山東省食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/74
• 分類號: G01N30/74;G01N30/86;G01N30/06
• 代理公司: 濟南泉城專利商標(biāo)事務(wù)所37218
• 代理人: 劉麗

1.一種忍冬藤中5-O-[4′-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎寧酸的含量測定方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)取供試品忍冬藤藥材粉末，在150±10℃加熱8分鐘～15分鐘，放冷，加水50mL，密塞，稱定重量，超聲功率500W，頻率40kHz處理15分鐘～45分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，收集續(xù)濾液；

(2)精密吸取續(xù)濾液，注入液相色譜儀，色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以體積分?jǐn)?shù)比0.1％～1％的酸溶液為流動相B，采用梯度洗脫方式：0min→20min：乙腈8％→15％，酸溶液92％→85％，檢測波長為216±2nm、292±2nm、316±2nm或327±2nm，以外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定供試品溶液中5-O-[4′-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎寧酸的含量；

外標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)曲線法中使用的對照品是通過以下步驟得到的：

(1)取忍冬藤藥材500g，粉碎成粗粉，加8倍量體積分?jǐn)?shù)為50％的甲醇溶液，超聲功率500W，頻率40kHz提取2次，每次0.5小時，合并提取液并濾過，以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收提取溶劑至干，得干浸膏a；

(2)干浸膏a加等量水使溶解，以D101大孔吸附樹脂柱進(jìn)行純化，柱填料用量為干浸膏重量的2倍，以水為洗脫溶劑，洗脫3個柱體積，收集洗脫液并合并，以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑至干得干浸膏b；

(3)干浸膏b加等量水使溶解，以Sephadex LH-20凝膠柱進(jìn)行純化，柱體積為樣品水溶液體積的15倍，以水為洗脫溶劑，洗脫3個柱體積，以40分之一柱體積作為一份收集洗脫液，以HPLC進(jìn)行檢測，合并含有目標(biāo)成分的洗脫液，以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑至干，以Sephadex LH-20凝膠柱反復(fù)純化2次，得到干浸膏c；

(4)干浸膏c加水使溶解，0.45μm微孔濾膜濾過，經(jīng)半制備HPLC純化，色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動相為乙腈-0.4％冰醋酸溶液，體積比4:96，327nm檢測，收集含有目標(biāo)成分的洗脫液，收集液經(jīng)濃縮干燥后可得5-O-[4′-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎寧酸，按照峰面積歸一化法計算，純度大于98％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于忍冬藤藥材粉末過五號篩。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于忍冬藤藥材粉末取0.125g～0.25g。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于忍冬藤藥材粉末在150℃加熱10分鐘。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于步驟(1)中超聲處理時間為30分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于標(biāo)準(zhǔn)曲線法中標(biāo)準(zhǔn)曲線為y＝1.5205x-2.1952，相關(guān)系數(shù)r＝1.0000，x為進(jìn)樣量，取值范圍30-3100ng，y為峰面積。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于加樣回收率為95.0％～105.0％。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含量測定方法，其特征在于步驟(2)中的酸溶液為冰醋酸溶液、甲酸溶液或磷酸溶液。