[發(fā)明專利]抑制軍團菌微生物源抗菌肽及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610388200.8
• 申請日: 2016-06-02
• 公開（公告）號: CN107459561A
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發(fā)明（設計）人: 王宏鵬;李音;于林凱;吳元鋒;黃俊;楊瑞芹;劉士旺;毛建衛(wèi)
• 申請（專利權）人: 浙江科技學院
• 主分類號: C07K11/02
• 分類號: C07K11/02;C12P21/04;A61K38/15;A61P31/04;A61P11/00
• 代理公司: 杭州宇信知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙)33231
• 代理人: 張宇娟

技術領域

本發(fā)明涉及微生物活性物開發(fā)利用領域，具體涉及一類新型生物活性多肽及其制備方法。

背景技術

1976年在美國費城退伍軍人大會爆發(fā)了急性發(fā)熱性呼吸道疾病造成221人感染，其中34人死亡，經(jīng)研究首次確認由軍團菌(Legionella spp.)的感染導致軍團病。隨著城市規(guī)模的發(fā)展，人口越來越密集，使得軍團病在全球頻繁爆發(fā)。2016年3月受污染的空調(diào)組件造成澳悉尼市政廳車站附近爆發(fā)軍團菌感染。2015年7月美國紐約布朗克斯區(qū)南部集中爆發(fā)，確診113例感染者，死亡12人。2015年杭州市疾病預防控制中心的調(diào)查表明，杭州市公共場所集中空調(diào)系統(tǒng)軍團菌污染較嚴重檢出率高達33％，分布較廣。

軍團菌是一類水生菌群,可在非常惡劣的生存環(huán)境下生存，尤其在與現(xiàn)代生活息息相關的人工環(huán)境中存活，如空調(diào)機的冷卻塔、噴水池、淋浴、汽車水箱與自動玻璃清洗器、游泳池等。研究表明軍團菌一般寄生在原生動物中，通常以氣溶膠的形式被吸入，并在人肺泡巨噬細胞和肺上皮細胞中復制，導致呼吸道感染，引起嚴重的非典型肺炎，其病死率可高達22.8％。與人們已經(jīng)熟識的非典SARS不同，雖然其檢出率很高，但人們對其缺乏了解，不能及時的進行防護或醫(yī)治，容易造成極大危害，故軍團病又被稱為“另類非典”。軍團菌感染已嚴重威脅公共衛(wèi)生安全，成為急待解決的醫(yī)學難題。

目前軍團菌的殺菌方法主要包括物理的(如紫外線、加熱等)和化學的(氯化等)方法。在控制軍團菌方面，化學方法應用的較為廣泛，但考慮它們可能對人體安全、設備和環(huán)境等產(chǎn)生不利影響，使得化學方法受到局限。在軍團菌病的治療方面，目前使用通常使用紅霉素作為治療藥物。但紅霉素對胃酸不穩(wěn)定，口服吸收不完全，血藥濃度低，組織濃度也不能達到治療的滿意效果，且有較多的胃腸反應。上述的軍團菌控制和治療方面的措施還不能阻止軍團菌感染問題，尋找與紅霉素抗菌作用類似，臨床藥理等特性優(yōu)于紅霉素，又能提高血藥及組織濃度的新的藥物是治療軍團菌感染及其他感染疾病急需解決的重大科學問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種來源于芽孢桿菌HZ16(CGMCC No.12406)的新型生物活性多肽的制備方法。

為了實現(xiàn)上述目的及其他相關目的,本發(fā)明采用如下技術方案：

本發(fā)明的第一方面,提供了一類分離的生物活性多肽,其包括：

a)由Acyl-Glu-Val-Leu-Leu-Asp-Leu-Leu-OH所示的氨基酸組成，Acyl-部分是C10～C16的一系列不同鏈長的直鏈或帶有支鏈的脂肪酸。如下式(I)所示

Acyl是C10～C16直鏈或帶有支鏈的脂肪酸；

或式中經(jīng)取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且有同等活性的衍生多肽。

b)或序列中經(jīng)取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸且有同等活性的由(a)衍生的多肽。

c)該類抗菌肽包括全L-型和全D-型對映異構體或者所述的抗菌肽任意一個或幾個氨基酸用L-型和D-型氨基酸取代。

d)所述的生物活性肽或所述多肽的衍生物為環(huán)縮酚肽以及Pumilacidin類物質的分子量在999～1080之間，分別為1035分子式C₅₃H₉₃N₇O₁₃、1049分子式C₅₄H₉₅N₇O₁₃、1063分子式C₅₅H₉₇N₇O₁₃、和1077分子式C₅₆H₉₉N₇O₁₃。

較優(yōu)的，所述生物活性肽的來源為芽孢桿菌的發(fā)酵物。

較優(yōu)的，芽孢桿菌HZ16發(fā)酵液中的環(huán)縮酚肽以及Pumilacidin類物質具有較強的抑制軍團菌活性。

較優(yōu)的，所述生物活性肽具有抑制微生物的生物活性，特別的對于軍團菌有很高的選擇 性。

較優(yōu)的，所述生物活性肽具有

本發(fā)明的第二方面,提供了前述生物活性多肽的制備方法,包括如下步驟：

1)發(fā)酵：將芽孢桿菌HZ16接種到LB培養(yǎng)基中發(fā)酵24h,獲得發(fā)酵液。

2)干燥：將步驟1)中收集的發(fā)酵液利用冷凍干燥法除掉水分。

3)粗提：利用有機溶劑對步驟2)中獲得的固體用乙酸乙酯溶劑進行超聲波震蕩萃取，獲得粗提物。