[發明專利]心肌細胞特異啟動子及其應用

有效

• 申請號: 201610374248.3
• 申請日: 2016-05-31
• 公開（公告）號: CN105779457B
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 楊磊;王世強
• 申請（專利權）人: 北京大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/85
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

本發明公開了心肌細胞特異啟動子及其應用。本發明公開的心肌細胞特異啟動子，是下述a)或b)或c)的DNA片段：a)3′端至少含有序列表中序列1的第927?1501位核苷酸序列，并且從序列1的第927位開始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延長，得到長度為575至1501bp的任意一個DNA片段；所述DNA分子具有啟動子功能；b)與a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有啟動子功能的DNA片段；c)在嚴格條件下與a)或b)限定的核苷酸序列雜交，且具有啟動子功能的DNA片段。實驗證明，本發明的啟動子具有心肌組織特異性和心臟特異性。

技術領域

本發明涉及生物技術領域中心肌細胞特異啟動子及其應用。

背景技術

進入21世紀以來，心血管疾病已經成為了威脅人類健康的重要疾病。在全球范圍內，心血管疾病的發病率呈現逐年升高的趨勢，在我國，心血管病患者大約有2.3億人，每年死于心血管病的約300萬人，可以說，心血管疾病已經成為威脅人類健康的第一殺手。心力衰竭是心血管疾病導致死亡的主要原因之一，約有40％的心血管疾病發展成為心力衰竭，因此，探明心衰發病的原因，機理，以及找到恰當的治療心衰靶位點的意義十分重大。

心力衰竭的發病機制非常復雜，已經有很多的研究者從不同的角度出發來闡明心力衰竭的發展過程。研究證明，有大量的細胞內分子信號通路參與了這一過程，例如：壓力負荷是引起心力衰竭的一個重要因素，病理性的壓力通過G蛋白耦聯受體，鈣調蛋白依賴性蛋白激酶(CAMKII)，絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)，蛋白質磷酸酶鈣調磷酸酶，和轉錄因子心肌細胞增強因子2(MEF2)，活性T細胞核因子(NFAT)這一信號通路，最終引起心衰相關基因的表達的變化，從而引起心肌細胞的肥大，衰竭。這些復雜的信號通路有相當一部分是相互重疊與相互影響的，在不同信號通路相互重疊的節點，例如GSK3β，HDACs極可能成為心衰治療的重要靶點。

在對心臟疾病進行基因治療時，如何對完成對心臟靶向作用成為其中的重要一環，目前急需一種具有心臟或心肌細胞特異性的啟動子。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供具有心肌細胞特異性啟動子功能DNA分子。

為解決上述技術問題，本發明首先提供了來源于大鼠(Rattus norvegicus)的DNA分子，該DNA分子的名稱為CMRP，CMRP具有心肌細胞特異性啟動子功能，CMRP是下述a)或b)或c)的DNA片段：

a)3′端至少含有序列表中序列1的第927-1501位核苷酸序列，并且從序列1的第927位開始、按照序列1的核苷酸序列向序列1的5′端延長，得到長度為575至1501bp的任意一個DNA片段；所述DNA片段具有啟動子功能；

b)與a)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且具有啟動子功能的DNA片段；

c)在嚴格條件下與a)或b)限定的核苷酸序列雜交，且具有啟動子功能的DNA片段。

其中，序列1由1501個核苷酸組成。

上述DNA分子中，所述嚴格條件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下雜交并洗膜2次。每次5min 0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下雜交并洗膜2次。每次15min。

上述75％或75％以上同一性，可為80％、85％、90％、95％以上的同一性。

本領域普通技術人員可以很容易地采用已知的方法，例如定向進化和點突變的方法，對本發明的啟動子核苷酸序列進行突變。那些經過人工修飾的，具有與本發明分離得到的啟動子核苷酸序列70％或者更高同一性的核苷酸，只要保持了表達靶基因的啟動子活性，均是衍生于本發明的核苷酸序列并且等同于本發明的序列。