[發(fā)明專利]L?色氨酸的發(fā)酵和提取工藝

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610360760.2
• 申請日: 2016-05-29
• 公開（公告）號: CN105861588B
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙春光;哈志瑞;孟剛;馬文友;陳崇安;詹志林;馬吉銀
• 申請（專利權(quán)）人: 寧夏伊品生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P13/22
• 分類號: C12P13/22;C12N15/70;C07D209/20;C12R1/19
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• 代理人: 暫無信息

1.分離提取L-色氨酸的方法，其包括：

（一）向含有L-色氨酸的發(fā)酵液加入明礬和NaHSO₃后，攪拌并加熱；

（二）納濾以分離得到色氨酸微濾液和菌體蛋白；

（三）用閃蒸脫氣機(jī)對所述色氨酸微濾液脫氣；

（四）將脫氣的色氨酸微濾液進(jìn)行色譜分離，得到色氨酸提取液；

（五）將所述色譜提取液蒸發(fā)，至其色氨酸濃度提高至5%，再通過雙效結(jié)晶器進(jìn)行濃縮結(jié)晶；

（六）將所述結(jié)晶獲得的漿料用酸調(diào)節(jié)pH至6.0~7.0，然后進(jìn)行梯度降溫，終點(diǎn)溫度控制在18~40℃，再進(jìn)行離心分離；

（七）對所述離心分離獲得的濕晶體閃蒸干燥，獲得含水率0.5~1.0%的色氨酸晶體；

（八）對所述離心分離獲得的一次母液脫色，脫色液過濾后進(jìn)入雙效結(jié)晶器濃縮結(jié)晶并再進(jìn)行離心分離；和，

（九）將所述色譜分離的殘液與所述再進(jìn)行離心分離的二次母液合并制成生物肥料。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述含有L-色氨酸的發(fā)酵液是通過發(fā)酵生產(chǎn)L-色氨酸的方法制備的，所述發(fā)酵生產(chǎn)L-色氨酸的方法包括：

（1）改造細(xì)菌染色體上的野生型的tdcD基因，使改造獲得的細(xì)菌的tdcD酶的表達(dá)量和/或酶活性降低；和，

（2）用步驟（1）改造而得到的細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)L-色氨酸。

3.權(quán)利要求2所述的方法，其中，改造細(xì)菌染色體上的野生型的tdcD基因，使改造獲得的細(xì)菌的tdcD酶的表達(dá)量和/或酶活性消失。

4.權(quán)利要求3所述的方法，其中，改造細(xì)菌染色體上的野生型的tdcD基因，使改造獲得的細(xì)菌的tdcD酶的表達(dá)量和/或酶活性徹底消失。

5.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述含有L-色氨酸的發(fā)酵液是通過發(fā)酵生產(chǎn)L-色氨酸的方法制備的，所述發(fā)酵生產(chǎn)L-色氨酸的方法包括：

（1）改造細(xì)菌染色體上tdcD基因的野生型的調(diào)控元件，使改造獲得的細(xì)菌的該調(diào)控元件對其下游酶基因的表達(dá)啟動能力減弱但不消失；和，

（2）用步驟（1）改造而得到的細(xì)菌發(fā)酵生產(chǎn)L-色氨酸。

6.權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述調(diào)控元件是啟動子。

7.權(quán)利要求2或5所述的方法，其中，所述細(xì)菌是埃希氏菌屬細(xì)菌。

8.權(quán)利要求2或5所述的方法，其中，所述細(xì)菌是大腸桿菌。

9.權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述下游酶基因是tdcD基因。

10.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述納濾是用陶瓷納濾膜納濾。

11.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述菌體蛋白進(jìn)一步制成高蛋白飼料。

12.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述酸是硫酸。

13.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述明礬為所述發(fā)酵液體積的0.1％~1.0％。

14.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述NaHSO₃為所述發(fā)酵液體積的0.1％~1.0％。

15.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述加熱是加熱到40~80℃。

16.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述色譜分離是用SSMB色譜系統(tǒng)進(jìn)行的。

17.權(quán)利要求1所述的方法，其中，在所述色譜分離中，以0.05-0.8%氨水將色氨酸進(jìn)行解脫。

18.權(quán)利要求1或16所述的方法，其中，所述色譜分離包括：

（1）首尾循環(huán)連接色譜系統(tǒng)的1區(qū)、2區(qū)、3區(qū)和4區(qū)的各層析柱，使得脫氣的色氨酸微濾液在各層析柱內(nèi)置換循環(huán)，不排出；

（2）切斷各層析柱間連接，對3區(qū)的層析柱出料；

（3）向1區(qū)的層析柱加入0.05-0.8%氨水，并收集1區(qū)的層析柱的洗脫液；和，

（4）依次連接色譜系統(tǒng)的1區(qū)、2區(qū)和3區(qū)，并收集3區(qū)的層析柱的洗脫液。

19.權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述一次母液經(jīng)過10%的粉狀活性炭脫色，脫色溫度65-70℃，脫色時間60min。