[發明專利]62aa多肽類似物及其載體和應用

有效

• 申請號: 201610351478.8
• 申請日: 2016-05-25
• 公開（公告）號: CN105777874B
• 公開（公告）日: 2020-03-10
• 發明（設計）人: 劉曉娟;沈愛國;朱曼輝;陳輝
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C12N15/11;C12N15/85;A61K38/16;A61P27/02
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 徐激波

本發明公開了62aa多肽類似物及其載體和應用。本發明利用生物工程技術，基因重組一段多肽類似物對應的序列到pCMV?HA真核表達載體。經酶切和序列分析證明重組成功后，將此真核表達多肽類似物對應的質粒轉染到脈絡膜血管內皮細胞，免疫印跡證明多肽的蛋白表達，實現了多肽的重組。并通過免疫共沉淀驗證此多肽類似物可促進Fra?1與MMP?1相互作用，并通過細胞生物學實驗表明此多肽類似物具有抑制CNV后CECs的增殖、遷移及管腔生成能力。該多肽類似物高效表達，純化工藝簡單，有利于進一步大規模制備。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體是62aa多肽類似物及其載體和應用。

背景技術

脈絡膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)，包括血管發生和血管生成過程，是多種可造成嚴重不可逆視力喪失的視網膜疾病的共同病理基礎。CNV的發展是一個非常復雜的動態過程，對于其發生發展的具體機制仍然知之甚少。CNV主要病理機制是源自脈絡膜的新生血管，穿過Bruch膜及視網膜色素上皮，進入視網膜下腔，繼而產生出血、滲出和瘢痕化的過程。作為CNV發生的關鍵性細胞，脈絡膜微血管內皮細胞(CECs)對于研究這種異常血管的發生和防治具有重要的意義。因此，抑制CNV后CECs的增殖、遷移及管腔生成，可為尋找CNV有效的干預靶點并開發新的治療藥物提供理論依據，對于CNV相關的視網膜疾病臨床治療具有十分重要的開發前景。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種62aa多肽類似物，具有抗CNV活性功能。本發明的另一目的是提供上述62aa多肽類似物的應用。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：

62aa多肽類似物，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

編碼所述的62aa多肽類似物的基因，其DNA序列如SEQ ID NO.2所示。

含有所述的62aa多肽類似物的編碼基因的DNA序列的載體。

所述的載體，將62aa多肽類似物的DNA序列連接進pCMV-HA真核表達載體，構建出重組表達質粒。

所述的62aa多肽類似物在制備用于抗CNV活性的藥物中的應用。

所述的62aa多肽類似物在制備用于抑制CECs增殖、遷移及管腔形成的藥物中的應用。

有益效果：與現有技術相比，本發明利用生物工程技術，基因重組一段多肽類似物對應的序列到pCMV-HA真核表達載體。經酶切和序列分析證明重組成功后，將此真核表達多肽類似物對應的質粒轉染到脈絡膜血管內皮細胞(CECs)，免疫印跡證明多肽的蛋白表達，實現了多肽的重組。并通過免疫共沉淀驗證此多肽類似物可促進Fra-1與MMP-1相互作用，并通過細胞生物學實驗表明此多肽類似物具有抑制CNV后CECs的增殖、遷移及管腔生成能力。該多肽類似物高效表達，純化工藝簡單，有利于進一步大規模制備。本發明所獲得的多肽類似物能夠抑制Fra-1與MMP-1相互作用，抑制脈絡膜血管內皮細胞(CECs)的增殖、遷移及管腔生成，抑制CNV發生發展?？蔀閷ふ褻NV有效的干預靶點并開發新的治療藥物提供理論依據。對于應用于CNV相關的視網膜疾病臨床治療具有十分重要的開發前景。

附圖說明

圖1是62aa多肽類似物抑制Fra-1與MMP-1的相互作用結果圖；

圖2是62aa多肽類似物加強Fra-1對MMP-1的抑制作用結果圖；

圖3是62aa多肽類似物抑制CNV后脈絡膜血管內皮細胞增殖結果圖；

圖4是62aa多肽類似物抑制CNV后脈絡膜血管內皮細胞遷移結果圖；

圖5是62aa多肽類似物抑制CNV后脈絡膜血管內皮細胞管腔生成結果圖。