[發明專利]一種化橘紅的組培快繁方法

有效

• 申請號: 201610347079.4
• 申請日: 2016-05-24
• 公開（公告）號: CN105941151B
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發明（設計）人: 雷軍強;韋穎婷;覃穩梅;李玉秋;莫曉君;韋倩梅
• 申請（專利權）人: 象州縣科學技術局
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙)11350
• 代理人: 羅?？?/td>

1.一種化橘紅的組培快繁方法，其特征在于：步驟如下：

(1)外植體的建立：于春季萌芽前，剪取1年生化橘紅頭枝，剪去嫩梢段和基部老化部

分，留半木質化莖段，用自來水沖洗10分鐘后，于質量濃度為0.4%的洗衣粉溶液中浸泡8-12分鐘，再用自來水沖洗干凈，然后用質量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗3-4次，瀝干水分，用質量濃度為1.0%的次氯酸鈉消毒10-12分鐘，然后用無菌水沖洗7-8次，用鑷子夾取清洗好的莖段，在無菌操作臺上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取1.5-2.5cm的帶芽莖段作為外植體；

（2）啟動培養：將滅菌后的外植體接種到經高溫滅菌的啟動培養基中培養，培養條件為溫度 25～27℃，光照強度為2400-2500lx，光照時間15-16h/d，在培養室中無菌培養23-25天后，將沒有染菌的材料切成帶 1～2 個芽的莖段接種于分生培養基中培養，分生培養基的成分為：MS+ N⁶ 芐基腺嘌呤（6-BA) 2.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.4mg/L +維生素B1 1.6-1.8mg/L+谷氨酸1.7～1.8mg/L +4%糖蜜+瓊脂7g/L，培養基pH 值為6.0；在光照強度為2300-2400lx，光照時間14-15h/d，溫度為26-27℃的條件下，培養30-35天；

（3）繼代培養：將植株莖段轉接入經高溫消毒的繼代培養基，在培養溫度為25-26℃，光強 2000～2500lx，光照時間為17h/d的條件下培養33-35d；

（4）生根培養：在無菌條件下，剪取長2-3cm繼代培養得到的帶葉莖段，插入生根培養基中進行生根培養；培養溫度26～28℃，光強2000～22001x，光照時間15h/d；

（5）煉苗：當經過生根培養后的生根試管苗根長約1.0～2.0cm時，將組培苗進行室內煉苗，煉苗溫度為：27-28℃，光照強度為5000-6500lx，室內瓶煉5-6天后，敞口煉苗4天；

（6）移栽：取出試管苗，洗凈根上的培養基，移栽到用0.2%KMnO 4 消毒過的米糠+黃土+細河沙+草炭按照2-3:5:1:0.5的比例做基質的營養杯中，澆足水，保持空氣濕度為85％-90%，溫度25～26℃，避免陽光直射，35-38天后，移出溫室進行全光照煉苗6-7d，及時澆水，然后移栽大田；

所述的化橘紅的組培快繁方法，步驟（2）中的啟動培養基的成分為：MS+ N⁶ 芐基腺嘌呤（6-BA) 1.3mg/L+萘乙酸（NAA）0.3mg/L+維生素B11.0mg/L+3%糖蜜+瓊脂6-7g/L，培養基pH值為6.2；

所述的化橘紅的組培快繁方法，步驟（3）中所述步驟（3）中繼代培養基的成分為：MS+N 6 芐基腺嘌呤（6-BA) 2.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.45-0.55mg/L+維生素B1 0.8mg/L+維生素C1.4-1.6mg/L+谷氨酸1.8～2.1mg/L+4%糖蜜+瓊脂8g/L，培養基pH值為6.1；

所述的化橘紅的組培快繁方法，步驟（4）中生根培養基的成分為：1/2MS+NAA0.02mg/L+ABT0.2mg/L+IBA0.7～0.9mg/L+4.5%糖蜜+瓊脂8g/L，pH=6.0-6.2。