[發明專利]一種用于檢測口蹄疫病毒O型、A型和Asia1型混合感染的引物、試劑盒、使用方法及其應用

在審

• 申請號: 201610345931.4
• 申請日: 2016-05-23
• 公開（公告）號: CN105779658A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 李海利;王克領;郎利敏;徐引弟;張立憲;朱文豪;張青嫻;游一;蘭亞莉;徐照學;王治方
• 申請（專利權）人: 河南省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122
• 代理人: 王明朗

技術領域

本發明涉及一種用于檢測口蹄疫病毒O型、A型和Asia1型混合感染的引 物、試劑盒、使用方法及其應用，屬于生物技術領域。

背景技術

口蹄疫(aphthaeepizooticae；footandmouthdisease,FMD)是由口蹄疫病毒 引起的一種人獸共患的急性、熱性、高度接觸性傳染病，其臨診特征是在口腔 粘膜、四肢下端及乳等處皮膚形成水皰和爛斑。該病傳播迅速，流行面廣，成 年動物多取良性經過，幼齡動物多因心肌受損而死亡率較高。口蹄疫廣泛流行 于世界各地，造成了巨大的經濟損失，各國政府及國際組織高度重視，被列為 全球各國共同商定撲滅的頭號法定傳染病。隨著國際貿易的日趨增加，物質交 流和國際交往越來越頻繁，給口蹄疫的預防和控制增加了難度，因此世界各國 都花費大量人力、物力和財力來研究、控制和消滅口蹄疫。

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouthdiseasevirus)屬于微RNA病毒科中的口蹄疫 病毒屬，是RNA病毒中最小的一個。口蹄疫病毒具有多型性、易變異的特點。 根據其血清學特性，可以分為7個血清型，即A、O、C、SAT1(南非Ⅰ)、SAT2 (南非Ⅱ型)、SAT3(南非Ⅲ型)及Asia1型(亞洲1型)。各個血清型間無交 叉免疫現象。每一個血清型又包含若干個亞型，同型各個亞型之間也僅有部分 交叉免疫性。該病毒的這種特性給口蹄疫的防制帶來了許多困難。

口蹄疫病毒在患病動物的水皰液、水皰皮、淋巴液及發熱期血液內的含量 最高，其次是各組織器官、分泌物、排泄物，可長期存在并向外排毒，退熱后 病毒可以出現于乳、糞、尿、淚、涎水及各臟器中。口蹄疫病毒對外界環境的 抵抗力很強，耐干燥。在自然條件下，含毒組織及污染的飼料、飲水、飼草、 皮毛及土壤等所含病毒在數日乃至數周內仍具有感染性。口蹄疫病毒對酸和堿 都特別敏感，在pH3.0和pH9.0以上的緩沖液中，病毒感染性將瞬間消失，2％～4％ 氫氧化鈉、3％～5％福爾馬林溶液、5％氨水、0.2％～0.5％過氧乙酸或5％次氯酸鈉 等均為口蹄疫病毒良好的消毒劑。

口蹄疫是一種傳染性極強的傳染病，一經發生往往呈流行性，在牧區，多 呈現大流行，疫情一旦發生，可隨動物的流動迅速蔓延，經過一定時期后疫情 才逐漸平息。口蹄疫可感染多種動物，偶蹄目動物易感性最高，易感性高低的 順序依次為黃牛、奶牛、牦牛、水牛、豬、羊、駱駝。

對于口蹄疫的防治目前尚無特效藥物療法，主要采取綜合防制措施及對癥 療法。最根本的辦法是消除患病動物、帶毒動物和徹底消毒，切斷傳播途徑。 因此應加強檢疫和口蹄疫監測，以防口蹄疫擴散。

目前，根據流行病學、臨診癥狀和病例剖檢特點可以做出口蹄疫的初步診 斷，但確診需要進行實驗室診斷。病毒的分離與鑒定和血清學診斷是實驗室診 斷常用的方法，但較費時費力，耗時較長。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種用于檢測口蹄疫病毒O型、A型和 Asia1型混合感染的引物、試劑盒、使用方法及其應用，采用本發明的試劑盒， 能夠在三個小時內做出診斷，為口蹄疫臨床診斷和分子流行病學調查提供一種 有效的分子生物學診斷方法。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：一種用于檢測口蹄疫病 毒O型、A型和Asia1型混合感染的引物，所述的引物包括引物對FMDO、FMDA 和FMDAsia，其中，

引物對FMDO：

上游引物FMDOF：5′-TGGCCTCAAAGACTCTCG-3′

下游引物FMDOR：5′-CAAGCTACAGATCACTTTAC-3′

引物對FMDA：

上游引物FMDAF：5′-GCAACCCAGATGTTGAT-3′

下游引物FMDAR：5′-CCACATGGACTATGGAA-3′

引物對FMDAsia：

上游引物FMDAsiaF：5′-CTGGGTTTTACAAACCTGTG-3′

下游引物FMDAsiaR：5′-CTCTGACGTCACAATTGGC-3′。

一種用于檢測口蹄疫病毒O型、A型和Asia1型混合感染的試劑盒，所述 的試劑盒包括引物對FMDO、FMDA和FMDAsia，其中，

引物對FMDO：

上游引物FMDOF：5′-TGGCCTCAAAGACTCTCG-3′