[發明專利]一種利用葡萄籽提取物制備低聚原花青素的方法

有效

• 申請號: 201610345527.7
• 申請日: 2016-05-23
• 公開（公告）號: CN106045959B
• 公開（公告）日: 2018-04-24
• 發明（設計）人: 徐揚;陶仁友;江文;楊洋;石業新;袁德寬;余紅梅;周小華
• 申請（專利權）人: 湖南鑫利生物科技有限公司;重慶大學
• 主分類號: C07D311/62
• 分類號: C07D311/62;C12G1/00
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一、技術領域

本發明屬于原花青素分離制備技術領域，具體涉及一種利用葡萄籽提取物制備低聚原花青素的方法。

二、背景技術

低聚原花青素是來源于植物、由聚合度低于5的原花青素組成的混合物，具有抗氧化、抗輻射、螯合金屬離子等優點，廣泛用于醫藥及保健等領域，是一種具有高經濟價值的生物活性物質。

現有制備低聚原花青素的方法，例如申請號為CN201410140039.3、名稱為“一種低聚原花青素的制備方法”的發明專利，該方法以60～70％的乙醇在pH4.0～4.4的條件下提取單體、低聚體和高聚體原花青素，再利用大孔樹脂吸附進行吸附分離，獲得了聚合度為2-4的低聚體產物，提升了原花青素中有效成分低聚體的含量。該方法的主要缺點是：原花青素溶于水和乙醇，并不受pH的影響，因此在pH4.0～4.4區間，難以分別提取出單體、低聚體和高聚體原花青素；此外，大孔吸附樹脂的分離精度有限，不能將單體、低聚體和高聚體原花青素完全分離，難以獲得聚合度僅在2～4的低聚體產物。又例如申請號為CN201410116698.3、名稱為“一種低成本的低聚原花青素的制備方法”的發明專利，該專利介紹了采用冷溶、過濾、納濾、噴霧干燥等技術，得到聚合度為2～3的低聚原花青素。該方法的主要缺點是：采用冷溶僅能部分分離高聚體原花青素；采用納濾雖能完全除去高聚體原花青素，但也因納濾膜的截留分子量區間分布將聚合度為3～5的低聚體原花青素截留，低聚體原花青素產率低，原料浪費大，生產成本高。

三、發明內容

本發明的目的是針對現有生產低聚原花青素方法的不足之處，提供一種利用葡萄籽提取物制備低聚原花青素的方法。該方法以葡萄籽提取物為原料，通過提取、分離其中的原花青素并進行深加工，生產出高附加值產品，提高經濟效益。

本發明的原理是：原花青素溶于水和乙醇，而無機鹽、氨基酸、蛋白質和糖類則不溶，因此用無水乙醇處理原花青素原料并過濾，可獲得脫去無機鹽、氨基酸、蛋白質和糖類的原花青素溶液。吸附樹脂是以弱極性或非極性基團為吸附官能團的反應性高分子，其吸附官能團可與原花青素分子發生相互作用而產生吸附；由于原花青素是由兒茶素和表兒茶素組成的酚類化合物，其聚合度不同，極性有所不同，與吸附樹脂發生的相互作用力不同，在洗脫劑的作用下解吸的順序不同，因此，選擇合適的洗脫劑，可在一定范圍內洗脫分離出確定聚合度區間的原花青素。原花青素聚合度不同，分子量不同，分子直徑也不同，在流經確定孔徑、基于分子篩原理的MCI GEL樹脂時所走的路徑不同，因此，可在一定范圍內將其分離。液體的沸點隨真空度增加而降低，因此在高真空度的條件下，可在常溫下使其與目標物分離，從而獲得高品質的產品。

本發明的目的是這樣實現的：一種利用葡萄籽提取物制備低聚原花青素的方法，以葡萄籽提取物為原料，通過制備原花青素乙醇溶液、制備初分離濃縮液、裝配MCI GEL樹脂層析分離系統、制備低聚原花青素濃縮液、制備低聚原花青素凍干粉、制備高聚原花青素凍干粉共6個步驟，制備出低聚原花青素凍干粉和高聚原花青素凍干粉。其具體的工藝步驟如下：

(1)制備原花青素乙醇溶液

稱取一定量葡萄籽提取物，按照葡萄籽提取物質量/無水乙醇體積比為1∶50～100kg/L的比例，在攪拌下將其加入到無水乙醇中，處理10～30min后抽濾，分別收集濾渣和濾液，對收集的濾渣，主要含聚合度超過10的高聚體原花青素，用于制備飼料抗氧化劑；對收集的濾液，即為原花青素乙醇溶液，用于下一步制備初分離濃縮液。

(2)制備初分離濃縮液

第(1)步完成后，將第(1)步收集的原花青素乙醇溶液泵入真空濃縮器中，在溫度為60～80℃、真空度為0.06～0.08MPa的條件下進行真空濃縮，直至濃縮液體積降低至原花青素乙醇溶液體積的1/10～1/20時止。分別收集真空濃縮液和真空濃縮冷凝液，對收集的真空濃縮冷凝液，用于再次溶解葡萄籽提取物；對于收集的真空濃縮液，按照該濃縮液體積/純凈水體積之比為1∶4～8L/L的比例加入純凈水，攪拌均勻后用截留分子量為1000～5000Da的超濾膜在表壓為0.05～0.2MPa的條件下進行超濾，直至超濾截留液/超濾濾過液的體積比為1∶6～10L/L時止。分別收集超濾濾過液和超濾截留液，對收集的超濾截留液，即為初分離濃縮液，主要由低聚體原花青素組成，用于后續步驟制備低聚原花青素；對收集的超濾濾過液，主要含無機離子、單糖、寡糖和氨基酸，泵入生化處理池進行生化處理，達標后排放。

(3)裝配MCI GEL樹脂層析分離系統