[發(fā)明專利]一種基于片狀黑磷的類固醇免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610339990.0
• 申請日: 2016-05-23
• 公開（公告）號: CN106018851B
• 公開（公告）日: 2018-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏琴;任祥;張勇;李燕;杜斌;胡麗華;龐雪輝;范大偉
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92;G01N27/327
• 代理公司: 濟(jì)南譽(yù)豐專利代理事務(wù)所(普通合伙企業(yè))37240
• 代理人: 李茜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種基于片狀黑磷的類固醇免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，采用黑磷@離子液體復(fù)合材料作為檢測基底材料，增強(qiáng)導(dǎo)電性的同時(shí)，又能增加信號分子在傳感表面的固載量上，通過多孔PtAu合金膜的修飾，制備一種檢測類固醇的電化學(xué)免疫傳感器，屬于新型功能材料與生物傳感檢測技術(shù)領(lǐng)域。

技術(shù)背景

類固醇是廣泛分布于生物界的一大類環(huán)戊稠全氫化菲衍生物的總稱。就雌二醇而言，它可以補(bǔ)充雌激素不足，常用于治療女性性腺功能不良、雙側(cè)卵巢切除術(shù)后、更年期綜合征如潮熱、出汗和精神、神經(jīng)癥狀等。但是會(huì)有不良反應(yīng)，如腹部絞痛或脹氣，惡心，踝及足水腫等。

目前對于類固醇的檢測方法不是很多，主要以放射性免疫分析，氣相色譜質(zhì)譜，液相色譜質(zhì)譜為主。但是這些方法需要大型設(shè)備及專業(yè)儀器，需要專業(yè)培訓(xùn)的技術(shù)人員進(jìn)行操作。而免疫傳感器是將免疫學(xué)方法與分析化學(xué)方法相結(jié)合的一種生物傳感器，通過抗原與抗體之間的特異性結(jié)合，構(gòu)建了操作簡便、結(jié)構(gòu)簡單、選擇性好、靈敏度高的免疫傳感器。本發(fā)明制備了一種基于片狀黑磷的類固醇免疫傳感器。

本發(fā)明采用黑磷與離子液體作用形成的復(fù)合材料為基底材料，實(shí)現(xiàn)了信號分子的高通量負(fù)載。本發(fā)明還采用了多孔PtAu合金膜構(gòu)建免疫傳感器，既保證了穩(wěn)定性，又增加了類固醇抗體的負(fù)載，實(shí)現(xiàn)了類固醇的靈敏檢測。該方法具有成本低、特異性好、檢測快速等優(yōu)點(diǎn)，而且制備過程較為簡單，有效克服了目前類固醇檢測方法的不足。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是基于黑磷@離子液體P@IL復(fù)合材料為基底材料，構(gòu)建了一種無酶，超靈敏的電化學(xué)免疫傳感器。

本發(fā)明的目的之二是通過多孔PtAu合金膜的使用，實(shí)現(xiàn)了對類固醇的超靈敏檢測。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下

1. 一種基于片狀黑磷的類固醇免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用

（1）將直徑3 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水洗凈；將1 ~ 10 μL、1 ~ 10 mg/mL黑磷@離子液體P@IL復(fù)合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；

（2）將投影面積為5 ~ 10 mm²多孔PtAu合金膜覆蓋在電極表面，超純水沖洗；

（3）滴加1 ~ 10 μL類固醇抗體標(biāo)準(zhǔn)溶液于電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干；

（4） 滴加1 ~ 10 μL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5% ~ 1.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干；

（5）滴加1 ~ 10 μL、0.005 ~ 20 ng/mL的一系列不同濃度的類固醇抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液至電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干。

2. 黑磷@離子液體P@IL復(fù)合材料的制備

取0.2 ~ 2.0 mg的片狀黑磷加入到0.5 ~ 20 mL的離子液體1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽BMIM?BF₄中，振蕩12 h，得到復(fù)合材料黑磷@離子液體P@IL。

3. 多孔PtAu合金膜的制備

室溫下，將投影面積為5 ~ 30 mm²的PtAuAg合金膜漂浮在16 mol/L的硝酸液面上，腐蝕10 ~ 100 min，將腐蝕后的合金膜用超純水洗至中性，即得到多孔PtAu合金膜。

4. 一種基于片狀黑磷的類固醇免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，所述的類固醇選自下列之一：雌酮，雌二醇，炔雌醇。

本發(fā)明有益成果

（1）黑磷的使用，能夠很好的促進(jìn)電極表面的電子傳遞，同時(shí)實(shí)現(xiàn)了對傳感器底層比表面積成功放大，達(dá)到高通量負(fù)載。

（2）黑磷@離子液體P@IL復(fù)合材料的使用，使得生物分子的負(fù)載量大大提升，擴(kuò)展了傳感器的線性范圍，降低了檢出限。

（3）多孔PtAu合金膜的使用，增加了傳感器表面的電子傳輸能力，增強(qiáng)了傳感器的穩(wěn)定性，實(shí)現(xiàn)了類固醇超靈敏穩(wěn)定檢測。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

一種基于片狀黑磷的類固醇免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用

（1）將直徑3 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水洗凈；將1 μL、1 mg/mL黑磷@離子液體P@IL復(fù)合材料滴加到電極表面，超純水沖洗，室溫下晾干成膜；

（2）將投影面積為5 mm²多孔PtAu合金膜覆蓋在電極表面，超純水沖洗；