[發明專利]一種去甲基金霉素發酵液效價的檢測方法

有效

• 申請號: 201610332799.3
• 申請日: 2016-05-19
• 公開（公告）號: CN105738532B
• 公開（公告）日: 2017-11-14
• 發明（設計）人: 陳紅麗
• 申請（專利權）人: 寧夏泰瑞制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于化學分析技術領域，尤其涉及一種去甲基金霉素發酵液效價的檢測方法。

背景技術

去甲基金霉素，別名地美環素、去甲基氯四環素、DMCT。本品抗菌譜與金霉素相似，其特點是作用比四環素、土霉素強，比金霉素穩定。臨床用于肺炎、尿路感染、淋病、細菌性痢疾、布氏桿菌病及小兒猩紅熱等。

去甲基金霉素抗菌活性較四環素強，吸收較好。是廣譜抗生素，起抑菌作用。其抗菌譜包括許多革蘭陽性和陰性菌、立克次體、支原體、衣原體、放線菌等?，F主要用于立克次體病、布氏桿菌病、淋巴肉芽腫、支原體肺炎、螺旋體病、衣原體病，也可用于敏感的革蘭陽性球菌或革蘭陰性桿菌所引起的輕癥感染。

去甲基金霉素的結構如下：

目前去甲基金霉素發酵液的檢測方法使用的是分光光度法進行檢測，加入一定的三氯化鐵顯色劑后進行測定，在檢測過程中處理麻煩，并且顯色時間長，三氯化鐵本身性質不穩定。因此開發一種能夠快速、準確測定去甲基金霉素發酵液效價的方法一直是有待解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的缺陷，提供一種方法簡便、快速，易于操作，結果準確，重復性好的去甲基金霉素發酵液效價的檢測方法。

一種去甲基金霉素發酵液效價的檢測方法，其特征在于采用高效液相色譜法對去甲基金霉素發酵液供試品進行檢測，然后采用外標法計算其效價。

所述高效液相色譜法的色譜儀條件為：

色譜柱：C18柱；

檢測器：DAD檢測器；

流動相：乙腈：0.5 %磷酸溶液＝20-30：80-70；

流速：0.80-1.20 ml/min；

進樣量：10-20 ul；

檢測波長：250-260 nm。

所述C18柱的規格為：長度250 mm或150 mm，內徑4.6 mm，填料粒徑5 um。

所述去甲基金霉素發酵液先用0.15 mol/L鹽酸溶液溶解后再配制成供試品。

所述用鹽酸溶液溶解后的甲基金霉素發酵液效價在10-200 u/ml。

本發明采用高效液相色譜法對去甲基金霉素發酵液效價進行檢測，其方法簡便、快速，易于操作，結果準確，重復性好，靈敏度高，當甲基金霉素發酵液效價在10-200 u/ml之間時，均有較好的線性關系，其線性相關系數為0.9991。

附圖說明

圖1為去甲基金霉素發酵液效價對照品的HPLC檢測圖譜；

圖2為去甲基金霉素發酵液效價的HPLC檢測圖譜；

圖3為去甲基金霉素發酵液效價的線性關系圖與回歸方程。

具體實施方式

為了使本領域的技術人員更好的理解發明的技術方案，下面結合具體實施方法對本發明所述技術方案作進一步的詳細說明。

實施例1

去甲基金霉素發酵液分析樣品的制備：

標準品溶液的制備：稱取去甲基金霉素發酵液效價對照品10 mg，精密稱定，置100 ml容量瓶中，加流動相溶解并定容至刻度，搖勻。用注射器取溶液經0.45um的有機濾頭過濾，得對照品溶液。

供試品溶液的制備：稱取去甲基金霉素發酵液1.0 g，精密稱定，置于100 ml容量瓶中，加0.15 mol/L的鹽酸溶液適量，溶解后定容至刻度，搖勻，放置10 min后，過濾，初濾液棄去。用1ml注射器取溶液經0.45 um的有機濾頭過濾，得供試品溶液；

標準品溶液和供試品溶液各制得5份。

色譜分析條件：島津LC-20A液相色譜儀，Waters C18色譜柱（250*4.6,5 um）；流動相：乙腈：0.5 %磷酸溶液＝（20:80），流速：1.0 ml/min；進樣量：20 ul；檢測波長：254 nm。柱溫箱35 ℃。

按上述色譜條件，對所有標準品和供試品分別進樣，如圖1所示，標準品溶液5個樣品分別進樣所得峰面積為2834815，RSD為0.12%；供試品溶液的5個樣品所得峰面積平均值為3898300，RSD為0.07%。

根據公式：

去甲基金霉素發酵液效價：a=A樣*C標/A標M樣*n

A樣: 發酵液樣品的峰面積；

A標: 標準品的峰面積；

C標: 標準品的效價（u/ml）；

M樣: 發酵液的質量（g）；

n: 發酵液的稀釋倍數。

采用外標法將標準品和供試品平均代入即可得供試品去甲基金霉素的效價為11806 u/g。