[發明專利]一種海帶多糖及其提取分離方法

有效

• 申請號: 201610332126.8
• 申請日: 2016-05-19
• 公開（公告）號: CN105777930B
• 公開（公告）日: 2019-12-17
• 發明（設計）人: 彭臻菲;魏碧娜;葉麗穎
• 申請（專利權）人: 福建衛生職業技術學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P39/06;A61P9/00
• 代理公司: 35100 福州元創專利商標代理有限公司
• 代理人: 蔡學俊

本發明提供了一種海帶多糖及其提取分離方法。先采用高溫高壓水提法提取海帶多糖粗提物，得率為3.6%，優于傳統水提法；多糖粗提物經DEAE?陰離子交換層析和Sephacryl S?300凝膠層析二步分離后得到海帶純化多糖PS?3?1，其分子量為132 KDa。所得海帶純化多糖具有自由基清除活性，其對羥自由基和超氧陰離子清除率均大于70%，可開發為自由基清除劑藥物；同時，該純化多糖對血管平滑肌細胞具有增殖抑制活性，其增殖抑制率達到75%以上，可用于制備血管平滑肌細胞增殖抑制劑藥物。

技術領域

本發明涉及海藻有效成分提取領域，具體涉及一種海帶多糖及其提取分離方法。

背景技術

海帶（Laminaria japonica）分布于我國東部沿海區域，是一種藥食同源類經濟型海藻。海帶的藥用歷史悠久，其藥學功效在諸多傳世經典藥學典著中均有記載。多糖是海帶主要活性成分之一，現代藥學研究結果表明，海帶多糖具有降血脂、抗凝血、抗動脈粥樣硬化、抗氧化等生物藥理學活性，是海帶活性成分研究的熱點之一。

熱水提取法是常用的海帶活性多糖提取方法，具有操作方便、工藝簡單、保持活性多糖結構穩定等特點。但是，因熱水提取法難以釋放大量胞內成分，使其提取效率低、耗時長，也成為阻礙其實踐應用的瓶頸。高溫、高壓條件可增強溶劑的細胞穿透力，提高其對海帶細胞壁破壞力，從而促進胞內多糖釋放，提高多糖提取效率，改善熱水提取法的瓶頸問題。

海帶活性多糖分離提取及活性篩選通常采取先提取分離、再進行活性篩選鑒定，在多糖活性篩選上缺乏針對性，影響多糖活性篩選效率。在活性多糖提取分離過程中追蹤多糖活性，選擇合適的分離純化方法，可在很大程度上提高活性多糖篩選效率。目前，以活性追蹤多糖提取分離過程的報道較少，而且，文獻報道水提海帶活性多糖多為粗組分，較少見單一多糖組分的活性研究報道，未見同時具有自由基清除活性和血管平滑肌細胞增殖抑制活性的海帶單一多糖組分的相關研究報道。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種海帶多糖及其提取分離方法。所制得的海帶多糖對自由基清除率達到70%以上，對血管平滑肌細胞增殖抑制率達到75%以上。

為實現上述發明目的，本發明采用如下技術方案：

一種可作為自由基清除劑和血管平滑肌增殖抑制劑的海帶多糖提取分離方法，包括如下步驟：

（1）取海帶干粉，用無水乙醇在50 ℃水浴脫色4 h，過濾取濾渣，室溫靜置風干即得脫色海帶干粉；

（2）取脫色海帶干粉，置于高壓滅菌鍋內，加入超純水進行提取；過濾，收集濾液并濃縮至原體積1/3-1/5；

（3）在步驟（2）濃縮后的水提液中加入無水乙醇進行分級沉淀，收集乙醇終體積濃度為75-80 %的沉淀物，即為多糖粗提物；

（4）取多糖粗提物溶于Tris-HCl緩沖溶液中，經DEAE陰離子交換層析法分離，洗脫液為含0-2 mol/L NaCl的Tris-HCl緩沖溶液，洗脫方式為連續洗脫；分別測定各洗脫峰組分對羥自由基清除活性，收集對羥自由基清除活性較高的第三洗脫峰組分，經透析、濃縮、冷凍干燥，得到多糖粗組分PS-3；

（5）取多糖粗組分PS-3，溶于pH值為7.0-7.5的PBS緩沖液，經Sephacryl S-300凝膠層析分離，洗脫液為含0.1 mol/L NaCl 的pH值為7.0-7.5 PBS緩沖液，測定洗脫峰組分對羥自由基清除活性，收集洗脫峰組分，經透析、濃縮、冷凍干燥，得到多糖純化組分PS-3-1。

步驟（2）中海帶干粉與超純水的重量比為1: 55-70，提取條件為：壓力0.1-0.14MPa，時間50-60 min。