[發(fā)明專利]酵母表達的柯薩奇病毒A6病毒樣顆粒及其應用

有效

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• 申請日: 2016-05-17
• 公開（公告）號: CN107384944B
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設計）人: 黃忠;周瑜;劉慶偉
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海巴斯德研究所
• 主分類號: C12N15/41
• 分類號: C12N15/41;C12N7/04;A61K39/125;A61P31/14;C12R1/84
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 陳詳;劉妍珺

本發(fā)明提供了酵母表達的柯薩奇病毒A6病毒樣顆粒及其應用，具體地，本發(fā)明提供一種制備柯薩奇A6病毒樣顆粒的方法，該方法中使用經密碼子優(yōu)化了的柯薩奇A6病毒P1蛋白和3CD蛋白編碼序列，在酵母細胞中表達，能夠自動組裝形成VLP，且表達量高，易于純化，純化獲得VLP具有較強的免疫原性。

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，具體地說，本發(fā)明涉及酵母表達的柯薩奇病毒A6病毒樣顆粒及其應用。

背景技術

手足口病是一種接觸性傳播疾病，廣泛流行于亞太平洋地區(qū)。主要感染五歲以下兒童引起發(fā)熱，手、足、口和臀部皰疹，以及咳嗽等癥狀，少數(shù)患兒可在短期內出現(xiàn)嚴重神經癥狀和心肺系統(tǒng)并發(fā)癥，甚至死亡。但是，目前還沒有針對手足口病的可用疫苗。

自2008年，腸道病毒71型(EV71)和柯薩奇病毒16型(CA16)因其廣泛傳播流行成為手足口病的兩個主要病原，疫苗的研究開發(fā)也多針對該兩種病毒。然而，最近幾年，關于柯薩奇CA6引起的手足口病全球流行，尤其是亞洲和歐洲地區(qū)流行的報道不斷增多，吸引了廣泛的關注?？滤_奇CA6病毒感染可以引起發(fā)熱、皰疹等典型手足口病癥狀，同時伴有皰疹爆發(fā)處潰瘍、結痂以及脫甲等非典型手足口病癥狀，并且不僅可感染幼年兒童也可對成年人造成嚴重傷害。最近有研究報道揭示柯薩奇CA6病毒顆粒的衣殼蛋白組成，并證明非結構蛋白區(qū)域(2A-3D)的變化是導致該病毒感染引起非典型手足口病癥狀的重要原因。

以中國某些省市的臨床研究報告為例，2013年，廣東省60.3％的手足口病爆發(fā)是由于柯薩奇CA6病毒感染引起，吉林長春爆發(fā)的手足口病案例中66.9％也由該病毒導致。這些臨床研究報告顯示了柯薩奇CA6的流行越來越廣泛，逐漸成為手足口病爆發(fā)的主要病原之一，而且，免疫了EV71或CA16疫苗的人群仍然可以被柯薩奇CA6病毒感染，所以針對柯薩奇CA6的疫苗開發(fā)十分必要，也能為以后雙價或多價疫苗的研究和發(fā)展作鋪墊。

因此，為了有效地、有針對性地預防柯薩奇CA6感染，本領域迫切需要開發(fā)針對柯薩奇CA6的疫苗及其應用。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種利用酵母表達的柯薩奇病毒A6病毒樣顆粒、其制備方法及其應用。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種分離的經密碼子優(yōu)化的多核苷酸，所述多核苷酸編碼柯薩奇A6病毒P1蛋白；并且所述多核苷酸選自下組：

(a)序列如SEQ ID NO.3所示的多核苷酸；

(b)核苷酸序列與SEQ ID NO.3所示序列的同源性≥95％(較佳地≥98％)的多核苷酸；

(c)與(a)-(c)任一所述的多核苷酸互補的多核苷酸。

本發(fā)明的第二方面，提供了一種表達載體，所述表達載體含有本發(fā)明第一方面所述的多核苷酸。

在另一優(yōu)選例中，所述表達載體還包括編碼柯薩奇A6病毒3CD蛋白的多核苷酸序列。

在另一優(yōu)選例中，所述表達載體包括第一表達盒和第二表達盒，所述第一表達盒包括SEQ ID NO.3所示的多核苷酸或其互補序列；所述第二表達盒包括SEQ ID NO.8所示的多核苷酸或其互補序列。

在另一優(yōu)選例中，所述表達載體為重組桿狀病毒。

在另一優(yōu)選例中，所述第一表達盒還包括啟動子，所述啟動子位于SEQ ID NO.3所示的多核苷酸的上游，優(yōu)選地所述啟動子為PAOX1啟動子。

在另一優(yōu)選例中，所述第二表達盒還包括啟動子，所述啟動子位于SEQ ID NO.8所示的多核苷酸的上游，優(yōu)選地所述啟動子為PAOX1啟動子。

本發(fā)明的第三方面，提供了一種宿主細胞，所述的宿主細胞含有本發(fā)明第二方面所述的表達載體，或者在基因組中整合有本發(fā)明第一方面所述的多核苷酸。