[發(fā)明專利]一種篩選抗豬圓環(huán)病毒病豬的MRC1分子標(biāo)記育種方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610327896.3
• 申請日: 2016-05-17
• 公開（公告）號: CN105755163B
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姜運(yùn)良;劉浩;孫億;劉根;鹿宏宇;王巖超;張萍;王昱丁;馬才
• 申請（專利權(quán)）人: 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
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• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及分子遺傳學(xué)領(lǐng)域，具體涉及了一種豬MRC1基因5′調(diào)控區(qū)突變位點的分子標(biāo)記方法及其在豬抗豬圓環(huán)病毒病育種中的應(yīng)用，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在不同品種豬中MRC1 5′調(diào)控區(qū)存在多處差異，其中－864位點處存在14bp堿基的插入\缺失，通過熒光素酶報告基因系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)，有14bp堿基插入的啟動子熒光素酶活性顯著高于14bp堿基缺失的啟動子熒光素酶活性，與抗豬圓環(huán)病毒病性較強(qiáng)的萊蕪豬群體含14bp堿基插入這一等位基因的頻率高于西方豬種，且MRC1基因的mRNA表達(dá)水平高相一致。可見通過檢測豬基因組中MRC1基因調(diào)控區(qū)－864位點的基因型作為與豬抗豬圓環(huán)病毒病性狀相關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)記，不僅方法簡便快速，而且不受環(huán)境影響，并可實現(xiàn)早期選種。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子遺傳學(xué)領(lǐng)域，具體涉及了一種篩選抗豬圓環(huán)病毒病豬的育種方法，通過判斷豬MRC1基因5′調(diào)控區(qū)突變位點的多態(tài)性來進(jìn)行選種，并人為的應(yīng)用該突變位點實現(xiàn)優(yōu)良育種。

背景技術(shù)

自1982年Tischer等在PK15細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus,PCV)以來，對其的研究已有約34年的歷史。PCV分為無致病性的PCV1和強(qiáng)致病性的PCV2兩種亞型。PCV2主要感染5～15周齡的豬，致死率約為15％。它是引起斷奶后仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PWMS)、呼吸道疾病綜合征(PRDS)、豬皮炎腎炎綜合征(PDNS)的主要病原(Stevenson etal.,2001)。PCV2感染機(jī)體后能引起免疫抑制，在與其它病原體一同共感染或繼發(fā)感染時，將會加重病情，嚴(yán)重的則會造成機(jī)體死亡。豬的抗病性狀屬于中等遺傳力水平的閾性狀，對病毒引起的疾病所產(chǎn)生的抗性是可以遺傳的。Opriessnig等的研究發(fā)現(xiàn)在感染PCV2后，皮特蘭豬所表現(xiàn)出的臨床癥狀最為嚴(yán)重，長白豬次之，杜洛克豬和大白豬的癥狀表現(xiàn)相對較輕。同時，本研究團(tuán)隊前期的研究發(fā)現(xiàn)在感染PCV2后，大長雜交豬出現(xiàn)日增重減慢、體溫升高、腹瀉、皮膚出現(xiàn)紫斑以及肺臟和脾臟出現(xiàn)充血、出血等癥狀，而萊蕪豬卻表現(xiàn)溫和，無明顯病變。以上結(jié)果表明不同品種豬對PCV2的抗性存在遺傳差異，地方品種豬抗PCV2的能力較強(qiáng)。豬不同品種間對PCV2的抗性存在遺傳差異，這為抗豬圓環(huán)病毒病豬的育種提供了基礎(chǔ)和前提。

萊蕪豬具有抗病耐粗、多胎高產(chǎn)、哺育力強(qiáng)、肉質(zhì)好等優(yōu)良特性。調(diào)查顯示，自2000年以來，在西方豬種PCV2感染率及死亡率呈逐漸升高的趨勢，而我國地方品種萊蕪豬未出現(xiàn)PCV2感染的報道，表現(xiàn)出對PCV2強(qiáng)的抗感染能力。本研究團(tuán)隊利用數(shù)字表達(dá)譜測序?qū)Ρ攘丝共⌒詮?qiáng)的萊蕪豬和易感的大長雜交豬感染PCV2后肺臟組織表達(dá)譜的差異，篩選出大量的差異表達(dá)基因，并根據(jù)定量驗證的結(jié)果發(fā)現(xiàn)攻毒后的豬MRC1基因的mRNA表達(dá)在大長雜交豬的肺臟中顯著下降；而在萊蕪豬中的表達(dá)相對穩(wěn)定，且出現(xiàn)上升趨勢(圖1)。這提示了MRC1基因可能與豬圓環(huán)病毒病的抗性有關(guān)。