[發明專利]RGD功能多肽修飾的稀土上轉換納米材料、其修飾方法及應用

有效

• 申請號: 201610326562.4
• 申請日: 2016-05-17
• 公開（公告）號: CN105860962B
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 袁雙虎;劉治國;黃勇;楊國仁;趙書強;賈永峰;于金明
• 申請（專利權）人: 山東省腫瘤醫院
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;C09K11/06
• 代理公司: 濟南信達專利事務所有限公司37100
• 代理人: 羅文曌

1.RGD功能多肽修飾的稀土上轉換納米材料，其特征在于由以下修飾方法得到：

首先利用二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇通過配體交換方法將油酸修飾的納米粒改性為表面氨基化的水溶性納米粒；

隨后將羧基化的2-氰基苯并噻唑偶聯到表面氨基化的水溶性納米粒表面，得到特異性連接臂修飾的水溶性納米粒；

接著在RGD功能多肽分子氨基端構建出半胱氨酸末端殘基，得到半胱氨酸修飾的RGD功能多肽；

最后將半胱氨酸修飾的RGD功能多肽特異性修飾到特異性連接臂修飾的水溶性納米粒表面，制成RGD功能多肽修飾的稀土上轉換納米材料。

2.根據權利要求1所述的RGD功能多肽修飾的稀土上轉換納米材料，其特征在于，所述修飾方法包括以下步驟：

1)表面氨基化的水溶性稀土上轉換納米材料的制備：

取表面油酸包裹的稀土上轉換納米材料用三氯甲烷分散，加入二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇，超聲反應一定時間后減壓濃縮除去三氯甲烷，純化得到聚乙二醇修飾的表面氨基化的水溶性稀土上轉換納米材料；

2)水溶性稀土上轉換納米材料表面特異性連接臂修飾：

將羧基化的2-氰基苯并噻唑的羧基活化，制備成琥珀酰亞胺酯溶液，接著將氨基化的水溶性稀土上轉換納米材料用三氯甲烷分散，將制備得到的琥珀酰亞胺酯溶液加入到納米材料分散液中，加入一定量的堿，反應完成后，除去未反應的原料，并提純得到特異性連接臂修飾的水溶性稀土上轉換納米材料；

3)半胱氨酸修飾的RGD功能多肽：

在RGD功能多肽溶液中加入N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸琥珀酰亞胺酯，調節體系pH值至8-8.5，使RGD功能多肽的末端氨基與N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸琥珀酰亞胺酯偶聯制備出含有受保護半胱氨酸殘基的多肽，接著將得到的保護性多肽在裂解液的作用下，脫去半胱氨酸的保護基團，并用半制備HPLC純化，得到半胱氨酸修飾的RGD功能多肽；

4)稀土上轉換納米材料表面RGD功能化多肽修飾：

將步驟2)得到的水溶性稀土上轉換納米材料的碳酸鹽緩沖溶液，加入步驟3)得到的半胱氨酸修飾的RGD功能多肽的碳酸鹽緩沖溶液中，同時加入防止巰基氧化的還原劑，反應一段時間后，純化得到RGD功能多肽修飾的稀土上轉換納米材料。

3.根據權利要求2所述的RGD功能多肽修飾的稀土上轉換納米材料，其特征在于：步驟1)所用的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇混合液中二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺的摩爾百分比率為5％-20％，總二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇總濃度為10-40mM，超聲反應的反應時間為10-40min。

4.根據權利要求2所述的RGD功能多肽修飾的稀土上轉換納米材料，其特征在于：步驟2)所述羧基化的2-氰基苯并噻唑的結構式如下：

式中，X為氧原子或者氮原子；m為0、1、2、3或者4。

5.根據權利要求4所述的RGD功能多肽修飾的稀土上轉換納米材料，其特征在于：步驟2)中活化羧基所用的活化劑為二環己基碳酰亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，以摩爾比計，其反應當量關系為羧基化的2-氰基苯并噻唑:二環己基碳酰亞胺:N-羥基琥珀酰亞胺＝1:(1-1.5):(1-1.5)；

所述堿為N,N-二異丙基乙胺和/或者三乙胺；

加入堿后再反應3-5h，反應完成。

6.根據權利要求2所述的RGD功能多肽修飾的稀土上轉換納米材料，其特征在于：步驟3)所述半胱氨酸修飾的RGD功能多肽具有式(I)所示的結構：

式(I)中，半胱氨酸為L構型。

7.根據權利要求6所述的RGD功能多肽修飾的稀土上轉換納米材料，其特征在于：步驟3)中N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基-半胱氨酸琥珀酰亞胺酯先溶解于二甲基甲酰胺或者二甲基亞砜，隨后再將N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸琥珀酰亞胺酯溶液加入到含有RGD功能多肽的碳酸鹽緩沖體系中，N-叔丁氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸琥珀酰亞胺酯與RGD功能多肽的摩爾比率范圍為(1.2-1.5):1，偶聯反應的反應時間為0.5-1h；

所述裂解液為三氟乙酸、三異丙基硅烷和去離子水的混合溶液，三氟乙酸、三異丙基硅烷和去離子水的體積百分比為95％:1-5％:1-5％，反應時間為5-10min。