[發(fā)明專利]卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610321878.4
• 申請(qǐng)日: 2016-05-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105993939B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭啟高;梁國(guó)魯;黨江波;李曉林;何橋;孫海艷;向素瓊;吳頔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京國(guó)昊天誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11315
• 代理人: 劉戈

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物繁育技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法。

背景技術(shù)

卡姆(Camu camu，Myrciaria dubia)為原產(chǎn)于南美洲秘魯共和國(guó)和巴西亞馬遜河流域熱帶雨林的水果。屬桃金娘科擬愛(ài)神木屬植物。由于其極高的維生素C含量(每100g鮮重中含1882–2280mg)，是當(dāng)之無(wú)愧的Vc之王。每100g鮮果重中含蛋白質(zhì)0.4g、碳水化合物5.9g、淀粉0.44g、可溶性糖1.26g、膳食纖維1.1g、脂肪0.2g、鈣15.7mg、銅0.2mg、鐵0.53mg、鎂12.4mg、錳2.1mg、鉀83.9mg、鈉11.1mg、鋅0.2mg。可見(jiàn)，卡姆果營(yíng)養(yǎng)豐富，尤其可作為天然的Vc源用于食品和保健品行業(yè)，具廣闊的市場(chǎng)前景。近年受到學(xué)界的廣泛關(guān)注。

在我國(guó)，卡姆少有報(bào)道，近年來(lái)有零星引種，未進(jìn)行規(guī)模化種植。其原因在于卡姆果繁殖難度較大，目前主要采用種子實(shí)生繁殖。卡姆童期較長(zhǎng)，實(shí)生苗需6-8年才可試花掛果，故難以在短期內(nèi)形成較大規(guī)模。由于學(xué)界對(duì)卡姆重視較晚，因此對(duì)其繁育的方法未得到相應(yīng)的重視。

植物繁殖的方法較多，如嫁接、扦插、組織培養(yǎng)等。組織培養(yǎng)繁殖是在人工培養(yǎng)基中，使離體組織細(xì)胞培養(yǎng)成為完整植株的繁殖方法。果樹(shù)的組織培養(yǎng)材料是植株離體材料，稱外植體。用頂端分生組織及其下的第1-2個(gè)葉原基切離培養(yǎng)的，稱莖尖培養(yǎng)；以小段成熟枝條進(jìn)行培養(yǎng)的稱莖段培養(yǎng)；以葉片或葉鞘組織進(jìn)行培養(yǎng)的，稱葉片培養(yǎng)。利用組織培養(yǎng)方法繁殖果樹(shù)植株具有占地面積小，繁殖周期短，全年都能進(jìn)行繁殖，繁殖系數(shù)高等特點(diǎn)。還可以消除果樹(shù)的某些病毒病，適應(yīng)果樹(shù)向品種更新快、矮化密植以及無(wú)病毒栽培方向發(fā)展的需要。目前已在多種植物中獲得成功并推廣。

然而現(xiàn)在僅有卡姆同屬植物組織培養(yǎng)的研究(Litz，1984)，但未有獲得不定芽或完整植株的進(jìn)一步報(bào)道。而卡姆則未見(jiàn)任何關(guān)于組織培養(yǎng)方面的報(bào)道。這大大限制了卡姆果的引進(jìn)推廣。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，為了解決卡姆繁育周期較長(zhǎng)，現(xiàn)有技術(shù)中沒(méi)有卡姆組織培養(yǎng)相關(guān)技術(shù)的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明公開(kāi)了一種卡姆組織培養(yǎng)快速繁育方法，包括以下步驟：

(1)取一年生卡姆帶節(jié)枝條為外植體；

(2)外植體滅菌：將所述外植體剪切為1-1.5cm的小成段，每段需帶節(jié)，于每升加入5滴吐溫-20的0.1％氯化汞溶液中振蕩處理3-4min，然后用無(wú)菌水清洗3遍；

(3)外植體誘導(dǎo)：將經(jīng)滅菌處理的所述外植體(形態(tài)學(xué)下端)插入不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)；

(4)不定芽增殖：待不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的所述外植體自節(jié)處生發(fā)腋芽后，將所述腋芽切下，接入不定芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)；

(5)壯苗：所述腋芽在不定芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-30天后，轉(zhuǎn)移至壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)增殖，得到壯苗；

(6)生根：切取所述壯苗于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到組培苗，即可移栽。

進(jìn)一步的，所述移栽包括以下步驟：

(1)煉苗：將生根后的組培苗帶瓶移至開(kāi)放條件下，放置4天后開(kāi)蓋，加水至培養(yǎng)瓶中淹沒(méi)幼苗1/3處以保濕，至7天后完成煉苗；

(2)清洗：煉苗完成后，于流水中沖洗所述組培苗，小心除去組培苗基部的培養(yǎng)基，晾去表面水分；

(3)消毒滅菌：將清洗并晾干的所述組培苗基部帶根浸入多菌靈800倍液中，15min后取出，晾干表面水分；

(4)定植：將消毒滅菌后的組培苗移栽于混合培養(yǎng)基質(zhì)中培養(yǎng)；

(5)施肥：定植成活10-14天后，以MS培養(yǎng)基大量元素溶液(含NH₄NO₃ 1650mg/L，KNO₃ 1900mg/L，CaCl₂·2H₂O 440mg/L，MgSO₄·7H₂O 370mg/L，KH₂PO₄ 170mg/L)稀釋10倍后噴施葉面；

(6)培養(yǎng)2月后即可移栽至田間。

進(jìn)一步的，所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為含有4.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤和0.2mg/L萘乙酸的1/2MS培養(yǎng)基。

進(jìn)一步的，所述不定芽增殖培養(yǎng)基和壯苗培養(yǎng)基配方相同，均為含有0.5mg/L 6-芐氨基腺嘌呤和0.5mg/L萘乙酸的1/2MS培養(yǎng)基。

進(jìn)一步的，所述生根培養(yǎng)基為含有2.0mg/L吲哚丁酸的1/2MS培養(yǎng)基。