[發明專利]一種基于唾液蛋白鑒別乳腺癌的凝集素芯片和試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201610315822.8
• 申請日: 2016-05-13
• 公開（公告）號: CN105929162B
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 李錚;劉夏薇;于漢杰;鐘耀剛;舒健;陽佳君
• 申請（專利權）人: 西北大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 西安億諾專利代理有限公司61220
• 代理人: 熊雁

技術領域

本發明涉及一種用于甄別癌癥的凝集素芯片，具體涉及一種基于蛋白鑒別乳腺癌的凝集素芯片及其試劑盒。

背景技術

乳腺癌是全球范圍內最常見的一類惡性腫瘤，嚴重危害女性身心健康。近年來，我國乳腺癌發病呈現明顯上升趨勢，IARC預計，我國女性乳腺癌患者于2030年可達234,000例，且死亡率較2008年將增長47.94%，由于發病率的不斷攀升、發病年齡的年輕化以及發病形式的多樣化，乳腺癌篩查、診斷和治療方面的進展一直備受關注。在歐美乳腺癌高發地區，其死亡率的降低一定程度上得益于基于影像學檢測手段的女性高危人群普查，更多的乳腺癌患者在發病早期被發現并得到及時有效的治療，但鉬靶乳腺X線攝影并非最為精準和經濟的早期篩查方法，仍有約11%的患者無法被檢出，特別是乳腺密度較高的女性患者；另一方面，我國人口基數龐大、地區差異明顯，采用更為無創、簡便、經濟的方法進行早期篩查和診斷將是我國乳腺癌防控的重點。

隨著醫學技術的迅速發展，人們不僅可通過組織活檢對腫瘤進行診斷，還實現了依據血清、尿液等體液中的生物指標對疾病進行檢測、監測和評估，使人們意識到采用更為簡便的方法檢測疾病的可能性。唾液作為一種來源于口腔唾液腺體的外分泌液，包含多種電解質和蛋白成分，當機體狀況出現變化時，唾液的流率和內容成分的種類和濃度也會發生改變。已有研究發現，同健康女性唾液相比，乳腺癌患者唾液中可檢測到不同濃度的HER2，VEGF和EGF蛋白等具有乳腺癌診斷潛能的血清標志物。同時，作為一種易采集、安全無創的臨床樣本，唾液中疾病特異性的標志物在頭頸癌、口腔癌、齲病、糖尿病、自身免疫性疾病等領域也得到了廣泛關注和應用。

糖生物學在癌癥相關研究中備受關注。細胞中，糖以單糖或寡聚糖的形式存在，寡糖鏈既是糖復合物（糖蛋白、糖脂等）的重要組成部分，同時也發揮著重要的生物學功能。作為一種翻譯后修飾，蛋白質糖基化最為人們所了解，研究表明，70%的人類蛋白質含有一個或多個糖鏈，這些糖鏈由甘露糖、半乳糖及N-乙酰葡糖胺等十幾種單糖組成，經不同糖基轉移酶、糖苷酶及磺基轉移酶的催化以不同的連接方式可構成龐大的糖鏈譜。相較于蛋白質和脂質部分，糖鏈的改變往往是對機體狀態變化更靈敏的應答，因此研究糖復合物糖基化將有望提高標志物的特異性與靈敏度，為癌癥早期發現、診斷、預后及耐藥性監測提供新的方法，而肝細胞癌中巖藻糖基化的甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein, AFP）的臨床應用是最成功的案例。

近十年間，大量文獻報道：未成熟的MUC型O-糖鏈、Lewis糖抗原在乳腺癌癌細胞表面被發現；乳腺癌患者血清中蛋白質糖基化修飾存在差異，具體表現為增多的MUC型O-糖鏈、含多聚N-乙酰乳糖胺(poly-LacNAc)結構的糖鏈、分支型N-糖鏈，減少的β1-4GlcNAc等分型和擁有LacdiNAc末端結構的復雜型N-糖鏈，以及糖鏈巖藻糖基化、唾液酸化修飾增加等；且這些糖基化的改變與某些臨床病理學參數（如腫瘤大小、淋巴結轉移等）存在相關性。但以上研究均以組織或血清作為樣本，人們對唾液中蛋白質糖基化水平的變化知之甚少，且尚未被應用于乳腺癌女性患者的早期篩查。凝集素是一類糖結合蛋白，其可識別不同的糖鏈結構并以多價形式與這些糖鏈特異性結合。通過將凝集素探針固定于經環氧化修飾的固體片基上制成凝集素芯片，憑借生物芯片便捷、快速和高通量的優勢，人們便可獲得臨床樣本中糖復合物糖基化相關信息，發現與疾病特異性相關的差異性表達的糖鏈。基于凝集素芯片技術對健康女性、乳腺疾病包括乳腺癌患者唾液中蛋白質糖基化進行分析，將有助于構建新的乳腺癌篩查、診斷方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種非損傷，通過唾液中糖鏈變化來鑒別乳腺癌的凝集素芯片和試劑盒及其應用。

本發明提供一種基于唾液蛋白鑒別乳腺癌的凝集素芯片，包括測試凝集素探針組，所述測試凝集素探針組至少包括PHA-E+L、LTL、BS-I、MAL-I、LCA、BPL、PTL-II、NPA、GSL-I的組合或者至少包括LTL、BS-I、MAL-I、LCA、BPL、NPA、GSL-I的組合。

本發明還提供利用上述凝集素探針制備得到的試劑盒。