[發(fā)明專利]一種測定血漿中skullcapflavoneII濃度的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610308527.X
• 申請日: 2016-05-11
• 公開（公告）號: CN106018580B
• 公開（公告）日: 2018-04-03
• 發(fā)明（設計）人: 劉史佳;張農(nóng)山;戴國梁;居文政;儲繼紅;李長印;許美娟;吳婷;張軍;馮麗雯
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省中醫(yī)院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙)32204
• 代理人: 黃天天

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種測定血漿中5，2`-二羥基，6，7，8，5`-四甲氧基黃酮(skullcapflavone II)濃度的方法。

背景技術(shù)

Skullcapflavone-II，即5，2`-二羥基，6，7，8，5`-四甲氧基黃酮，是從藥用植物黃芩中分離得到的黃酮類新化合物。SKullcapflavone-II具有對抗炎癥、病毒和免疫調(diào)節(jié)的作用。此外，許多成分有止癢、調(diào)節(jié)代謝紊亂、神經(jīng)保護、促進血管新生、抗癌和抗HIV的作用。Skullcapflavone-II具有多種生物學特性，如細胞毒性的假定作用，對肥大細胞組胺釋放的影響，通過胰蛋白酶抑制纖溶酶原激活物1型升高抑制劑和抗哮喘氣道炎癥反應。

其結(jié)構(gòu)式如下：

目前尚未關(guān)于Skullcapflavone-II體內(nèi)測定方法的文獻報道。本發(fā)明建立了Skullcapflavone-II在beagle犬體內(nèi)的測定方法，通過該方法對Skullcapflavone-II的藥物代謝情況進行探索性研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是建立一種準確高效測定血漿中skullcapflavone-II濃度的方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種測定血漿中skullcapflavone-II濃度的方法，血漿樣品經(jīng)預處理后經(jīng)液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)檢測其濃度，具體方法包括如下步驟：

(1)血漿樣品預處理：取血漿樣品，加入內(nèi)標新補骨脂異黃酮，加入一定量的乙酸乙酯進行有機溶劑萃取，取上清液在40℃氮氣吹干后，用流動相溶解后進樣分析；

(2)將步驟(1)預處理后的血漿樣品進行液相色譜分離：色譜條件中色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C₁₈柱；流動相：體積比為80∶20的乙腈與水；流速：0.2mL·min^-1； 柱溫：40℃；洗脫方式為等度洗脫；

(3)質(zhì)譜測定，條件為：

離子源：電噴霧離子化電離源ESI；離子檢測方式：多反應監(jiān)測MRM；離子極性：正離子；skullcapflavone-II碰撞電壓23eV；內(nèi)標新補骨脂異黃酮碰撞電壓29eV；毛細管電壓4.5kV；氣簾氣Curtain gas：20psi；離子源Gas1：70psi；離子源Gas2：80psi；脫溶劑溫度：400℃；CXP：9V；碰撞氣CAD：10V；DP：100V；EP：10V。檢測對象的離子通道：skullcapflavone-II m/z 375.1→345.1，內(nèi)標新補骨脂異黃酮m/z 323.3→255.1

(4)計算：采用內(nèi)標法，以skullcapflavone-II和內(nèi)標新補骨脂異黃酮的峰面積比值代入標準曲線方程計算skullcapflavone-II的濃度。

具體地，步驟(1)中，取血漿樣品500μL，加入100ng·mL^-1內(nèi)標新補骨脂異黃酮20μL，加入4mL乙酸乙酯，震蕩3min后3500×g離心10min，取上清液3.5mL在40℃氮氣吹干后，用100μL流動相溶解后，10μL進樣分析。

步驟(2)中，色譜柱長度為150mm，內(nèi)徑為2.1mm，填料粒徑為5μm。

其中，所述的血漿為給予了含skullcapflavone-II藥物的血漿。

在一個具體的實施方案中，所述血漿為人或動物的血漿。

在一個具體的實施方案中，所述血漿為犬血漿。所述的犬為beagle犬。

有益效果：本發(fā)明方法與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢：

(1)預處理方法簡便：使用有機溶劑液頁萃取法，適用于常規(guī)測定。

(2)專屬性強：采用Agilem ZORBAX SB-C₁₈色譜柱作為固定相，乙腈和水的混合液作為流動相，等度洗脫，Skullcapflavone-II保留時間為3.09min左右，內(nèi)標新補骨脂異黃酮保留時間為2.88min左右，4.5min完成測定，內(nèi)源性物質(zhì)不干擾二者的測定。

(3)靈敏度高：血漿最低定量限為1ng·mL^-1。

(4)本發(fā)明方法快速、準確、靈敏度高、操作簡便，為Skullcapflavone-II的血藥濃度測定提供依據(jù)，具有新藥開發(fā)的前景。本方法的血漿標準曲線線性范圍為1～4000ng·mL^-1，日內(nèi)和日間精密度RSD均小于10％。

附圖說明