[發(fā)明專利]一種多重PCR引物及其在大菱鲆養(yǎng)殖過程中的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610308352.2 | 申請日： | 2016-05-11 |
| 公開（公告）號： | CN105734166B | 公開（公告）日： | 2020-03-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉宏生;顧穎;張新剛;張力;趙健 | 申請（專利權(quán)）人： | 遼寧大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 沈陽杰克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21207 | 代理人： | 金春華 |
| 地址： | 110000 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 多重 pcr 引物 及其 大菱鲆 養(yǎng)殖 過程 中的 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明涉及一種多重PCR引物及其在大菱鲆養(yǎng)殖過程中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的一種多重PCR引物，由嗜水氣單胞菌特異性引物H、溫和氣單胞菌特異性引物S和舒伯特氣單胞菌特異性引物Sc組成。采用該多重PCR引物在大菱鲆養(yǎng)殖過程中快速鑒定致病菌的方法如下：提取大菱鲆病灶部位細(xì)菌的總DNA；以所提取的DNA為模板，采用上述的多重PCR引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；根據(jù)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠呈像結(jié)果判斷。本發(fā)明經(jīng)過一次PCR反應(yīng)可以同時(shí)檢測三種大菱鲆養(yǎng)殖過程中常見的致病菌，表現(xiàn)出很強(qiáng)的特異性和靈敏性。在大菱鲆養(yǎng)殖過程中，一旦有被這三種氣單胞菌感染的風(fēng)險(xiǎn)，即能夠做到快速鑒定致病源，為養(yǎng)殖戶挽回大量損失。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于病原微生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種大菱鲆養(yǎng)殖過程中常見的3種致病菌：嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)、溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)和舒伯特氣單胞菌(Aeromonas schubertii)的多重PCR檢測方法。
背景技術(shù)
有“多寶魚”之稱的大菱鲆已被引進(jìn)我國長達(dá)10年之久，憑借其優(yōu)良的苗種，先進(jìn)的創(chuàng)新模式和工業(yè)化養(yǎng)殖的潮流，逐漸成為全國引人注目的重要養(yǎng)魚工業(yè)。這一全新產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，對我國的水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)拉動均有很大作用，并為我國北方沿海城市工業(yè)化養(yǎng)魚的縱向發(fā)展奠定了雄厚的理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。然而隨著養(yǎng)殖規(guī)模的快速增長，養(yǎng)殖密度的增加，以及水體環(huán)境的惡化，一系列的疾病也隨之而來。近年來在大菱鲆養(yǎng)殖過程中細(xì)菌性疾病的急劇爆發(fā)嚴(yán)重影響并制約了我國大菱鲆養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，給養(yǎng)殖戶帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種對嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌和舒伯特氣單胞菌具有特異性強(qiáng)且靈敏性高的多重特異性引物。
本發(fā)明的另一目的是提供一種在大菱鲆養(yǎng)殖過程中，可快速鑒定致病源，為養(yǎng)殖戶挽回經(jīng)濟(jì)損失的大菱鲆養(yǎng)殖過程中快速鑒定致病菌的多重引物PCR檢測方法。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種多重PCR引物，由嗜水氣單胞菌特異性引物H、溫和氣單胞菌特異性引物S和舒伯特氣單胞菌特異性引物Sc組成。
所述的嗜水氣單胞菌特異性引物H的DNA序列為：
上游引物F1的序列為：CGACGTGTTTGGCGATATTTTTG
下游引物R1的序列為：GTCTTGGTCTTCTGGTAGCGA
所述的溫和氣單胞菌特異性引物S的DNA序列為：
上游引物F2的序列為：GCTGATTTTGGTGATGCGTTCA
下游引物R2的序列為：TACGTACAGATCCCCAGCCC
所述的舒伯特氣單胞菌特異性引物Sc的DNA序列為：
上游引物F3的序列為：GGGCCCGTTATGACCAGTTT
下游引物R3的序列為：AGGAGTGATCTTGAGCTTGACC。
優(yōu)選的，上述的多重PCR引物，所述的嗜水氣單胞菌為Aeromonas hydrophila，溫和氣單胞菌是Aeromonas sobria，舒伯特氣單胞菌為Aeromonas schubertii。
一種大菱鲆養(yǎng)殖過程中快速鑒定致病菌的多重PCR檢測方法，方法如下：
1)提取大菱鲆病灶部位細(xì)菌的總DNA；
2)以所提取的DNA為模板，采用上述的多重PCR引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；
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