[發明專利]一種生產硫酸軟骨素的方法

無效

• 申請號: 201610307883.X
• 申請日: 2016-05-11
• 公開（公告）號: CN105779532A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 龔鋼明;洪玲;趙芳芳
• 申請（專利權）人: 上海應用技術學院
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12R1/11
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 吳寶根

技術領域

本發明屬于微生物發酵領域，涉及一種硫酸軟骨素，具體來說是一種生產硫酸軟 骨素發酵液方法。

背景技術

硫酸軟骨素(ChondroitinSulfate，CS)是廣泛分布于動物軟骨組織中的一類 酸性黏多糖。2010年Jolly對許多微生物發酵進行分析，發現有多種微生物也能產生硫 酸軟骨素。例如巴斯德桿菌（Pasteurellamultocida），大腸桿菌（Escherichiacoli），芽 孢桿菌（Bacillus），等少數細菌中存在硫酸軟骨素。硫酸軟骨素分子結構為由D-葡萄糖 醛酸和N-乙酰氨基半乳糖構成的重復二糖單位組成的多糖，硫酸軟骨素一般含有50~70 個二糖基本單位，相對分子質量在10000~50000之間。按酯化的硫酸基團位置不同，硫酸 軟骨素分為A、B、C、D、E、F等多種類型。臨床上主要用于關節炎、肩關節痛、冠心病、心絞痛等 輔助治療，近年來，硫酸軟骨素在醫藥制劑、醫學材料、化妝品、保健品等領域更廣泛得到應 用，市場需求趨愈來愈大。我國生產和出口量逐年大幅增長，發展前景廣闊。

目前，我國主要采用酶解法或堿提-酶解法工藝從動物骨頭制備硫酸軟骨素。極少 有采用微生物發酵法生產硫酸軟骨素的報道。而動物骨資源比較貧乏，急待開發新的生物 資源及新的技術工藝來生產硫酸軟骨素。

發明內容

針對現有技術中的上述技術問題，本發明提供了一種生產硫酸軟骨素的方法，所 述的這種生產硫酸軟骨素的方法要解決現有技術從動物骨頭中生產硫酸軟骨素的方法中， 骨頭原料短缺難以擴大生產規模的技術問題。

本發明提供了一種生產硫酸軟骨素的方法，包括如下步驟：

1)將巨大芽孢桿菌以接種量為4-6％接種至種子培養基上進行震蕩培養15-18h，得到 種子培養液，種子培養條件為：轉速120-160r/m，初始pH值為7.0-7.2，發酵溫度為28-35 ℃；

2)將步驟1)得到種子液以接種量為4-6％接種到裝有發酵培養基的容器中，在搖床上 培養30-35h；即可得到含硫酸軟骨素發酵液，培養條件為：轉速120-160r/m，初始pH值為 7.0-7.2，溫度為30-35℃；

3)將得到的硫酸軟骨素發酵液提純后得到硫酸軟骨素。

進一步的，所述的巨大芽孢桿菌為巨大芽孢桿菌CICC10487。

進一步的，所述種子培養基由蔗糖、蛋白胨、酵母粉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、 氯化鈣、硫酸錳和水組成，每L培養基中，含有蔗糖15-20g，蛋白胨15-20g，酵母粉15-20g，氯 化鈉0.5-1.0g，硫酸鎂0.5-1.0g，磷酸二氫鉀1.5-2.5g，所述的氯化鈣0.2-0.5g，硫酸錳 0.1-0.5g，余量為水。

進一步的，所述發酵培養基由蔗糖、蛋白胨、酵母粉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、 氯化鈣、硫酸錳和水組成，所述緩沖液由磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉組成；每L培養基中，含有 蔗糖20-50g，蛋白胨10-15g，酵母粉10-15g，氯化鈉0.5-2.0g，硫酸鎂1.5-2.5g，磷酸二氫鉀 1.5-2.5g，氯化鈣0.2-0.5g，硫酸錳0.05-0.15g，磷酸氫二鈉1.0－4.0g，磷酸二氫鈉0.3－ 3.0g，余量為水。

具體的，采用乙醇沉淀法進行純化處理得到硫酸軟骨素。

通過本發明方法獲得的硫酸軟骨素多糖的產量約127mg/L。

本發明和已有技術相比，其技術進步是顯著的。本發明的方法步驟簡單，條件溫 和，產量較高，發酵生產原料不受動物骨原料短缺的限制，發酵產品可用于藥品原料和保健 品原料。

具體實施方式

實施例1

本發明提供了一種生產硫酸軟骨素的方法，包括如下步驟：

（1）將巨大芽孢桿菌CICC10487以接種量為5％接種至種子培養基上進行震蕩培養 16h，得到種子培養液。種子培養條件為：轉速120/m，初始pH值為7.0，發酵溫度為30℃，所 述種子培養基由蔗糖、蛋白胨、酵母粉、氯化鈉、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、氯化鈣、硫酸錳和水組 成，每L培養基中，含有蔗糖15-20g，蛋白胨15-20g，酵母粉15-20g，氯化鈉0.5-1.0g，硫酸鎂 0.5-1.0g，磷酸二氫鉀1.5-2.5g，氯化鈣0.2-0.5g，硫酸錳0.1-0.5g，余量為水。