[發明專利]一種基于DNA條形碼的搖蚊科兩個屬水生昆蟲的鑒別方法

在審

• 申請號: 201610306996.8
• 申請日: 2016-05-10
• 公開（公告）號: CN105713992A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 周瓊;鄭圓圓;謝從新;張秀杰;王軍;葛奕豪
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種基于DNA條形碼的水生昆蟲搖蚊科帕搖蚊屬和寡角搖蚊屬的鑒定方法， 其步驟是：

(1)DNA提取試劑盒法提取待鑒別的搖蚊科昆蟲的總DNA；

(2)利用DNA條形碼的通用引物PCR擴增線粒體COI基因前段序列；

(3)1％濃度瓊脂糖凝膠電泳，試劑盒法割膠回收COI擴增片段，測序；

(4)依據待鑒別的搖蚊科昆蟲的COI序列特征變異位點進行物種快速鑒別， 如下表所示。

187 346 帕搖蚊屬 C C 寡角搖蚊屬 T T

2.根據權利要求1所述的一種基于DNA條形碼的水生昆蟲搖蚊科帕搖蚊屬和寡 角搖蚊屬的鑒定方法，其特征在于，步驟(1)中，所述提取搖蚊科昆蟲總DNA 的個體為幼蟲。

3.根據權利要求1所述的一種基于DNA條形碼的水生昆蟲搖蚊科帕搖蚊屬和寡 角搖蚊屬的鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中，所述通用引物序列為：

COIF：5’-ggaatagtaggaacatcccttagaa-3’

COIR：5’-acttctgggtgtccaaagaat-3’。

4.根據權利要求1所述的一種基于DNA條形碼的水生昆蟲搖蚊科帕搖蚊屬和寡 角搖蚊屬的鑒定方法，其特征在于，步驟(2)中的PCR反應體系為為50μL，其 中10×PCRbuffer5μL，Mg²⁺5μL，dNTP3.5μL，正反向引物各l.5μL，Taq酶0.5U， DNA模板2μL，ddH₂O補足至50μL；反應條件如下：循環前94℃預變性5min， 每個循環包括94℃變性40s，55℃退火45s，72℃延伸60s，共設30個循環， 循環結束后于72℃延伸10min；電泳后純化并測序。