[發明專利]一種抗氧化肽混合物及其制備方法

有效

• 申請號: 201610303716.8
• 申請日: 2016-05-09
• 公開（公告）號: CN105779547B
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發明（設計）人: 張建華;劉亞楠;錢炳俊;姚曉敏;亞力坤江·阿山;王延輝
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

本發明公開了一種抗氧化肽混合物的制備方法，利用蝦副產物，通過α?胰凝乳蛋白酶和嗜熱菌蛋白酶兩步酶解，經Sephadex G?15凝膠層析和DEAE Sephacel離子交換色譜分離得到1,1?二苯基?2?苦基肼(DPPH)自由基清除能力為10.54±0.03μmol AAE/g pro，鐵離子還原能力(FRAP法)為89.29±0.01μmol AAE/g pro的抗氧化肽混合物。本發明還公開了由上述方法得到的抗氧化肽混合物，分子的大小為500?1000Da。本發明為蝦副產物提供了一種新的利用途徑，降低了資源浪費和污染，提升了蝦副產物的商業價值和利用率。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種源自蝦副產物的抗氧化肽混合物及其制備方法。

背景技術

氧化反應會對食品和生物系統產生很多不利的影響，是引起食品腐敗、營養品質和安全性下降的重要原因。近些年，抗氧化劑的用途越來越廣泛，不僅用于含脂肪食品的氧化預防，而且作為功能因子用于保健食品及化妝品等的開發。人工合成的抗氧化劑因具有潛在的副作用而受到限制，因此天然、無毒副作用的食源性抗氧化產品更有吸引力。天然抗氧化肽是以食物蛋白為原料，通過提取、酶解或發酵，然后通過分離純化制備的一類具有抗氧化效果的肽。

蝦副產物中蛋白質含量約占干重的50-60％，且氨基酸種類齊全，具有很高的營養價值，但目前利用率很低。如果能選用合適的酶對其進行酶解制備抗氧化肽，將會提高蝦副產物的利用價值。

因此，本領域的技術人員致力于通過酶解和純化的方式，利用蝦副產物等利用率低、商業價值小的蛋白質來源，制備抗氧化肽。

發明內容

本發明提供了一種源自蝦副產物的抗氧化肽混合物及其制備方法。具體通過以下技術方案實現：

本發明一方面提供了一種抗氧化肽混合物的制備方法，包括以下步驟：

步驟1、將蝦剝除蝦仁后剩余的蝦頭與蝦殼洗凈、烘干、粉碎，過篩，得到蝦副產物粉；

步驟2、向磷酸鹽緩沖液中加入上述蝦副產物粉，溶解得到蝦副產物總蛋白提取液；

步驟3、向上述蝦副產物總蛋白提取液中加入α-胰凝乳蛋白酶，混勻，進行水解反應；高溫終止水解反應，離心取上清液，得到α-胰凝乳蛋白酶酶解液；

步驟4、向上述α-胰凝乳蛋白酶酶解液中加入嗜熱菌蛋白酶，混勻，進行水解反應；高溫終止水解反應，得到嗜熱菌蛋白酶酶解液；

步驟5、透析上述嗜熱菌蛋白酶酶解液，取透析液中500-1000Da的組分；

步驟6、將上述500-1000Da的組分經凝膠層析分離，取凝膠層析分離產物中抗氧化活性最高的組分G₁；

步驟7、將上述組分G₁經陰離子交換色譜分離，取抗氧化活性最高的組分H₂。

進一步地，上述步驟2具體為：稱取0.4g蝦副產物粉，加入到6mL磷酸鹽緩沖液中，37℃搖床孵育2h，得到蝦副產物總蛋白提取液。

進一步地，上述步驟3具體為：向60mL蝦副產物總蛋白提取液中加入24mg 10000U/mgα-胰凝乳蛋白酶，漩渦混勻，在37℃下水解反應4h，90℃下終止水解反應，離心，取上清，得到α-胰凝乳蛋白酶酶解液。

進一步地，上述步驟4具體為：取α-胰凝乳蛋白酶酶解液9.8mL，添加12mg 175U/mL嗜熱菌蛋白酶，漩渦混勻，于70℃下水解反應6h，90℃下終止水解反應，得到嗜熱菌蛋白酶酶解液。