[發明專利]一種生物工程脫細胞軟骨的制備方法有效
| 申請號： | 201610297085.3 | 申請日： | 2016-05-09 |
| 公開（公告）號： | CN105879118B | 公開（公告）日： | 2018-03-02 |
| 發明（設計）人： | 史真;史偉云 | 申請（專利權）人： | 拜歐迪賽爾（北京）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | A61L27/36 | 分類號： | A61L27/36 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 100176 北京市北京經濟技*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 生物工程 細胞 軟骨 制備 方法 | ||
1.一種生物工程脫細胞軟骨的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
(1)取動物軟骨；
(2)使用包含一種或多種保護軟骨功能和組織完整性的混合保護液；
(3)使用高靜壓預分離軟骨內的細胞；
(3)采用復合核酸酶去除破碎細胞核；
(4)利用去垢劑脫除松散破碎細胞；
(5)在軟骨混合保護液中漂洗去除多余的核酸酶和細胞碎片；
(6)獲得具有正常膠原纖維的三維結構及排列極性的帶有生物特性的脫細胞軟骨；
所述混合保護液成分組成為：RPMI-1640培養基；硫酸軟骨素的濃度為50-100g/L；透明質酸的濃度為20-60g/L；右旋糖酐的濃度為15-30g/L；鏈霉素5-10mg/L，調節pH值為6.8-7.2，滲透壓為450-550mOsm。
2.如權利要求1所述的制備方法，所取軟骨的厚度在0.2-1.0mm之間，長寬為0.5cm和1cm的片狀或特定形狀，所述軟骨來自豬耳朵或牛耳朵或關節軟骨。
3.如權利要求1所述的制備方法，其中所述復合核酸酶包括DNA酶、RNA酶、其他核酸酶及其組合。
4.如權利要求1所述的制備方法，其中所述去垢劑包括十二烷基硫酸鈉、十二烷基肌氨酸鈉、海藻酸鈉、CHAPS活性劑中的一種或多種作為組合。
5.如權利要求1所述的制備方法，其中在軟骨混合保護液中漂洗去除多余的核酸酶和細胞碎片中漂洗的時間為5～10小時。
6.如權利要求1所述的制備方法，制備的軟骨材料放入無水氯化鈣分子篩內脫水，經裝袋密封并標記，用輻照劑量為25kGy的Gamma射線輻照滅菌5-10小時后在4℃下保存備用。
7.如權利要求1所述的制備方法，其中所述高靜壓的壓力條件為600-1000MPa，所述高靜壓的頻率為5-10次，每次6～8分鐘。
8.如權利要求3所述的制備方法，其中所述復合核酸酶使用核酸酶時濃度為3000-6000U/ml，核酸酶的脫細胞核時間為4-8小時，處理溫度為15-30攝氏度。
9.如權利要求3所述的制備方法，其中所述復合核酸酶使用DNA酶時濃度為3000-6000U/ml，DNA酶的脫細胞核時間為4-8小時，處理溫度為15-30攝氏度。
10.如權利要求4所述的制備方法，其中所述去垢劑十二烷基硫酸鈉的濃度為0.1-5％，十二烷基肌氨酸鈉的濃度為0.1-5％，CHAPS的濃度為5-10％，去垢劑使用時間為4-8小時。
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