[發明專利]一種生物樣本中硫代謝相關重要代謝物的分析新方法

有效

• 申請號: 201610293440.X
• 申請日: 2016-05-05
• 公開（公告）號: CN107345933B
• 公開（公告）日: 2019-05-14
• 發明（設計）人: 許國旺;趙潔妤;路鑫;胡春秀;趙春霞
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N27/62
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種生物樣本中硫代謝相關重要代謝物的分析方法，其特征在于：

(1)基于毛細管電泳-飛行時間質譜CE-TOFMS聯用技術采用連續壓力進樣方式對生物樣本進行分析，將含有50～200mM醋酸銨和0.5～4％甲酸(v/v)的待測樣品溶液壓力進樣5～60s連續3～7次，每次進樣后以背景電解質0.5～4％甲酸(v/v)水溶液作為間隔帶，壓力進樣10～60s；

(2)連續3～7次進樣結束后，毛細管兩端加23～30kV高電壓，利用待測樣品與背景電解質基質的不同而引起的電場強度差異實現樣本的在線富集。

2.根據權利要求1所述的分析方法，其特征在于：生物樣本采用毛細管電泳-飛行時間質譜聯用的分析過程：

(1)CE條件：分離柱使用未涂層的毛細管柱，毛細管的長度為80cm，內徑為50μm；毛細管溫度20℃，樣品盤溫度為5℃；鞘液分流比為1：100，流速為10μL/min；鞘液為50％(v/v)甲醇水溶液，鞘液含有濃度為0.1μM的六(1H,1H,2H-全氟乙氧基)鄰氮烯為參比用于質譜的實時校正；毛細管的分離電壓27kV，分離時間20min；

(2)TOFMS條件：毛細管分離電壓為27kV，分離時間20min；氮氣壓力為7psi，干燥氣溫度為300℃，干燥氣流速為7L/min；離子去簇電壓108V，錐孔電壓50V；毛細管電壓為4000V；質量掃描范圍為60～1000，質譜掃描速度為1.5張譜圖/s。

3.根據權利要求1所述的分析方法，其特征在于：待測樣品溶液為高電導的含有200mM醋酸銨和2％甲酸(v/v)的水溶液，背景電解質溶液為低電導的4％甲酸(v/v)水溶液。

4.根據權利要求1所述的分析方法，其特征在于：連續壓力進樣方式的樣品進樣壓力100mbar，進樣時間40s，連續進樣五次，每次進樣后以壓力100mbar，持續時間為40s的背景電解質溶液為間隔。

5.根據權利要求1所述的分析方法，其特征在于：所述的生物樣品為動物、人或植物細胞的提取物。

6.根據權利要求1所述的分析方法，其特征在于：采用內標法定量，根據線性定量曲線進行定量分析；內標為于待測樣品溶液中加入的終濃度2.5μg/ml苯丙氨酸-d₅。