[發(fā)明專利]一種芒果花誘導(dǎo)愈傷組織的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610292563.1
• 申請日: 2016-05-05
• 公開（公告）號: CN105900840B
• 公開（公告）日: 2018-01-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 農(nóng)艷豐;岑湘濤;蘇仕林;牛俊樂
• 申請（專利權(quán)）人: 百色學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京天奇智新知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11340
• 代理人: 但玉梅

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，涉及一種芒果花誘導(dǎo)愈傷組織的方法。

【技術(shù)背景】

芒果(mangifera indica)屬于漆樹科(anacardiaceae)芒果屬(meagifera)，是熱帶優(yōu)質(zhì)水果之一，是世界第二大熱帶水果。芒果肉質(zhì)細(xì)嫩，風(fēng)味濃郁，營養(yǎng)豐富，具有十二種必需氨基酸，維生素A和C、胡蘿卜素等含量較高。食用芒果具有抗癌、美化肌膚、防止高血壓、動脈硬化、防止便秘、止咳、清腸胃的功效，是消費者非常喜愛的熱帶亞熱帶著名水果，素有“熱帶果王”之美譽(yù)。中國是僅次于印度的第二大芒果生產(chǎn)國，芒果栽培地區(qū)主要分布于海南、廣西、廣東、云南和四川的金沙江干熱河谷區(qū)域，廣西百色市則以盛產(chǎn)芒果而聞名，具有很高的經(jīng)濟(jì)價值和社會價值。

芒果是基因高度雜合的木本植物，種子的存活期不長，用傳統(tǒng)的育種方法改良芒果較困難。因此建立成熟的芒果離體培養(yǎng)再生植株技術(shù)體系有利于芒果優(yōu)良品種性狀得到大量繁殖，并且有利于芒果種質(zhì)資源的搜集和保存。但目前芒果的離體培育技術(shù)仍較薄弱，已有采用芒果莖段誘導(dǎo)培養(yǎng)無菌芽的相關(guān)研究，但仍未見采用芒果花誘導(dǎo)培養(yǎng)愈傷組織的相關(guān)研究和報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

鑒于以上內(nèi)容，本發(fā)明提供了一種芒果花誘導(dǎo)愈傷組織的方法，該方法是經(jīng)過大量實驗研究得出的，其利用芒果花苞作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，摸索并篩選出了最適宜芒果花誘導(dǎo)培養(yǎng)愈傷組織的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，實現(xiàn)了芒果花誘導(dǎo)培養(yǎng)愈傷組織，得到無菌體系的作用，且愈傷組織誘導(dǎo)率高，獲得的愈傷組織的器官分化率高，可進(jìn)行規(guī)模化、工業(yè)化生產(chǎn)。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種芒果花誘導(dǎo)愈傷組織的方法，所述方法包括以下步驟：

1)外植體的剪取：剪取新長且花未開的芒果花穗；

2)預(yù)處理：用流水將步驟1)剪取的芒果花穗沖洗干凈，而后用多菌靈溶液進(jìn)行表面消毒，再用流水沖洗；

3)滅菌：將經(jīng)步驟2)處理后的芒果花穗置于無菌超凈工作臺上，用HgCl₂溶液浸泡滅菌，再用無菌水沖洗，得無菌芒果花穗；

4)接種、培養(yǎng)：在無菌超凈工作臺上將步驟3)的無菌芒果花穗上的花苞剪下，將單個花苞接種到培養(yǎng)基上進(jìn)行愈傷組織培養(yǎng)，獲得芒果愈傷組織；其中，所述培養(yǎng)基為1/2MS+1.0～5.0mg/L 2,4-D+30～120mg/L PVP，pH為5.8。

進(jìn)一步地，在步驟2)中，所述多菌靈溶液的質(zhì)量濃度為0.1％～0.5％。

進(jìn)一步地，所述步驟2)的預(yù)處理過程包括：用流水沖洗步驟1)所剪取的芒果花穗5min，而后用多菌靈溶液浸泡10～15min，再用流水沖洗10min。

進(jìn)一步地，在步驟3)中，所述HgCl₂溶液的質(zhì)量濃度為0.1％～0.2％。

進(jìn)一步地，所述步驟3)的滅菌過程包括：將經(jīng)步驟2)處理后的芒果花穗放在無菌超凈工作臺上，用HgCl₂溶液浸泡滅菌5～10min，而后采用無菌水沖洗5次，每次1～2min。

進(jìn)一步地，在步驟4)中，所述培養(yǎng)基為1/2MS+3.0mg/L 2,4-D+70mg/L PVP，pH為5.8。

進(jìn)一步地，在步驟4)中，所述愈傷組織培養(yǎng)為在溫度為26～28℃、濕度為70％的恒溫恒濕條件下暗培養(yǎng)。

本發(fā)明提供了一種芒果花誘導(dǎo)愈傷組織的方法，相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明通過采用芒果花誘導(dǎo)愈傷組織的方法培育獲得芒果再生組織。其利用芒果花苞作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，相對于已經(jīng)開放的芒果花，愈傷組織的分化能力更強(qiáng)，分化率更高，且未開放的花苞對消毒劑更敏感，剪取外植體后，先用一定濃度的多菌靈溶液作為消毒劑進(jìn)行消毒，再采用一定濃度的HgCl₂溶液進(jìn)行滅菌，消毒劑和滅菌劑的種類和濃度均根據(jù)芒果花的特性進(jìn)行選擇，同時消毒和滅菌時間嚴(yán)格控制，一方面可保證外植體消毒和滅菌充分，另一方面確保外植體的組織結(jié)構(gòu)不被破壞，消毒和滅菌效果好，為下一步處理做好充足準(zhǔn)備；然后，根據(jù)培養(yǎng)對象的營養(yǎng)要求，通過研究摸索篩選出適宜芒果花誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基的種類和濃度，并嚴(yán)格控制培養(yǎng)的溫度和濕度，在本發(fā)明培養(yǎng)條件下進(jìn)行誘導(dǎo)培育，愈傷組織形成快(相對于溫度在26℃以下，或28℃以上，愈傷組織形成時間可以縮短2-3天)，誘導(dǎo)率高，且愈傷組織的活力高，器官分化率高。