[發明專利]一種拆分格隆溴銨對映體及雜質檢查的高效液相色譜方法

有效

• 申請號: 201610291461.8
• 申請日: 2016-05-05
• 公開（公告）號: CN107345945B
• 公開（公告）日: 2019-12-17
• 發明（設計）人: 于航;楊晨
• 申請（專利權）人: 遼寧藥聯制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 21207 沈陽杰克知識產權代理有限公司
• 代理人: 羅瑩

本發明涉及一種高效液相色譜法拆分格隆溴銨對映體以及對映體雜質檢查的方法。通過高效液相色譜法將格隆溴銨對映體分離，確認格隆溴銨四個對映體的峰位，并按自身對照法計算格隆溴銨中對映體的限度；用正己烷配制各供試品，用正己烷?無水乙醇?二乙胺（97∶3∶0.1）作為流動相。采用高效液相色譜法分離格隆溴銨分離效果好，樣品用量低，定量無需對照品，無污染，成本低，適合消旋格隆溴銨的拆分。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種高效液相色譜法拆分外消旋物毒蕈堿受體拮抗劑格隆溴銨四種手性對映體以及其對映體雜質檢查方法的研究。

背景技術

格隆溴銨（Glycopyrronium Bromide）為季銨類抗膽堿藥，其結構中含有兩個手性碳原子，存在兩對對映異構體（RS、SR、RR、SS），即四個手性對映體，國內外已上市產品均為各對映體的混合物，即為外消旋物，其結構如（Ⅰ）所示：

（）

手性對映體尤其是手性藥物的拆分近年來已成為分析化學領域的重要課題之一，這是由于藥物的藥理作用是通過與體內的大分子之間嚴格的手性識別和匹配實現的，即手性藥物與生命體中的藥物靶點發生作用時具有顯著的立體選擇性，因此，在許多情況下，其化合物的不同對映體在生物體內呈現很大的藥效學、藥動學的差異，毒理作用的表現也會不同甚至完全相反。據研究得知，(3S, 2′ R)- 格隆溴銨的膽堿能拮抗作用最差，而(3R,2′S)- 格隆溴銨具有最強的膽堿能拮抗作用。

隨著人們對手性藥物對映體之間生物活性差異的認識，逐漸意識到發展單一對映體藥物的重要性，現在世界上各大制藥公司對單一對映體藥物的日益重視不僅反映在新藥開發上，更主要的意義是對已上市外消旋藥物再開發成為單一異構體藥物，因為這要比開發一個全新藥物更省時省錢，且單一對映體藥物可能療效更好、安全性更高、毒副反應較少，而這種療效最好、安全性高的新藥正是國內外醫藥行業所努力的目標。因此，對外消旋藥物通過手性拆分途徑開發單一對映體藥物其前景非常可觀的。

本發明針對外消旋藥物格隆溴銨的手性拆分展開研究，并通過4個對映體單體進行確定峰位，對各對映體進行含量測定（當以某種單體為主藥時）及對映體雜質含量測定（當對映體為雜質時），其深層意義為開發單一異構體新藥測定其含量、測定雜質（其他三種對映異構體）的含量。

在世界手性藥物研發能力高速發展的今天，研發成果的安全性與高效性成為全球制藥行業的首要關注點，而手性色譜分離與制備技術在近年內也在手性藥物的研發中扮演著越來越重要的角色。手性藥物質量控制越來越引起人們的關注,已成為藥物研究領域的熱點。高效液相色譜法是最常用的手性藥物分析方法之一,其中高效液相色譜手性固定相法更是經 典、簡便、快速的方法,鍵合型纖維素手性固定相具有性能穩定,拆分效果好,適用范圍廣的特點。

發明內容

本發明提供了一種高效液相色譜法拆分格隆溴銨對映體的方法，確認格隆溴銨四個對映體單體的峰位，并按自身對照法（無需對照品）計算格隆溴銨中對映體的含量，本發明是這樣實現的，它主要包括樣品的制備，液相色譜條件及定量計算方法；通過考察色譜條件，例如：色譜柱填料、流動相比例、檢測波長、柱溫等對格隆溴銨及其異構體分離的影響，綜合考慮峰形、峰位，選擇最佳分離條件。分別配制格隆溴銨單體的溶液，對峰位進行確證，最后，建立了自身對照法對格隆溴銨中的對映體雜質的進行定量及檢測。

本發明的液相條件中使用DAICEL（大賽璐藥物手性技術有限公司）提供的CHIRALCEL OZ-H手性色譜柱，該系色譜柱適合在正相流動相中使用，OZ為多糖衍生物正相涂敷型手性色譜柱，硅膠表面涂敷有纖維素-三（3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯），OZ為目前實際上使用范圍最廣的一種手性填料，亦為USP L80指定填料，在各類文獻中都報道了OZ柱優秀的分離能力和耐受性；流動相中正己烷-無水乙醇-二乙胺的比例為97∶3∶0.1，所有試劑均要求為HPLC級；檢測波長：220～240nm；色譜柱溫度為35℃～40℃，