[發(fā)明專利]CIK細(xì)胞及其培養(yǎng)方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610290919.8
• 申請(qǐng)日: 2016-05-04
• 公開（公告）號(hào): CN105886469B
• 公開（公告）日: 2017-12-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張文;張諾琳;陳偉雄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳瑞祥元科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0783
• 分類號(hào): C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 深圳市蘭鋒知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)44419
• 代理人: 曹明蘭

1.一種CIK細(xì)胞培養(yǎng)方法，其特征在于，所述方法步驟如下：

采集患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞；

將所述單個(gè)核細(xì)胞與抗CD3抗體、抗CD28抗體和細(xì)胞因子加入無血清培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)；所述誘導(dǎo)培養(yǎng)方法如下：

第0天，在所述單個(gè)核細(xì)胞的懸液中添加重組人干擾素終濃度為1000U/ml，再將所述懸液轉(zhuǎn)入抗CD3抗體和抗CD28抗體包被的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，并進(jìn)行培養(yǎng)；所述重組人干擾素為重組人IFN-γ；所述抗CD3抗體濃度為10μg/ml，抗CD28抗體濃度為10μg/ml；

第1天，向所述細(xì)胞培養(yǎng)瓶中添加所述無血清培養(yǎng)基和含有IL-1a、IL-2、IL-21細(xì)胞因子進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)；所述IL-1a的終濃度為100U/ml，所述IL-2的終濃度為500U/ml，所述IL-21的終濃度為300U/ml；

第2天，補(bǔ)充所述無血清培養(yǎng)基，并補(bǔ)充IL-2、IL-21，所述IL-2的終濃度為500U/ml，所述IL-21的終濃度為300U/ml；

第4天，細(xì)胞計(jì)數(shù)并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)袋中擴(kuò)大培養(yǎng)，此后每2-3天根據(jù)細(xì)胞密度補(bǔ)加含有IL-2、IL-21的所述無血清培養(yǎng)基，所述IL-2的終濃度為500U/ml，所述IL-21的終濃度為300U/ml；直至培養(yǎng)第14天。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于：在所述懸液中，第0天所述單個(gè)核細(xì)胞在所述懸液濃度為( 2-3 )×10⁶個(gè)/ml；

在第4天的培養(yǎng)中，控制所述單個(gè)核細(xì)胞的濃度為( 0 .5-1 .0 )×10⁶個(gè)/ml；

第4天后，每2-3天的培養(yǎng)中，控制所述單個(gè)核細(xì)胞的濃度為(1-2 )×10⁶個(gè)/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于：所述無血清培養(yǎng)基為KBM581。