[發(fā)明專利]一種牛血清白蛋白分度熱休克法提取工藝

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610290629.3
• 申請日: 2016-05-05
• 公開（公告）號(hào): CN107344965A
• 公開（公告）日: 2017-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊明;張旭群
• 申請（專利權(quán)）人: 天津康源生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/765
• 分類號(hào): C07K14/765;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司12209
• 代理人: 董一寧

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及白蛋白的制備方法，尤其涉及一種牛血清白蛋白分度熱休克法提取工藝。

背景技術(shù)

牛血清白蛋白(BSA)，又稱第五組分，是牛血清中的一種球蛋白，包含583個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點(diǎn)為4.7，是生物學(xué)諸多學(xué)科及醫(yī)、藥學(xué)各領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的生化試劑，也可用作醫(yī)藥保健食品、調(diào)味品。

牛血清白蛋白最常用的制備方法是以牛血為原料分離出血清，用硫酸銨分級(jí)沉淀后，經(jīng)辛酸處理精制而得；中國專利文獻(xiàn)CN 1544470C公開了一種牛血清白蛋白熱乙醇法提取工藝，其方法是采用3.8％枸櫞酸鈉抗凝血得到血漿，加熱加入辛酸鈉，調(diào)pH值后加乙醇，再經(jīng)過濾、脫鹽、濃縮、凍干后得牛血清白蛋白。上述牛血清白蛋白制備方法中需要添加許多成本較高的鹽類(如枸櫞酸鈉、辛酸鈉等)及有機(jī)化學(xué)物質(zhì)(乙醇溶劑等)，制備出白蛋白的純度難以保證，而且生產(chǎn)工藝較復(fù)雜，難以進(jìn)行大批量生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種純度高、工藝流程簡單、成本低的一種牛血清白蛋白分度熱休克法提取工藝。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種牛血清白蛋白分度熱休克法提取工藝，包括如下步驟：

1.分離血清：健康牛新鮮全血，去纖維蛋白，連續(xù)離心收集血清，紅血球另用；

2.提取：將血清和等量的生理鹽水加入反應(yīng)罐，20-40rpm攪拌混勻，邊攪拌邊加入0.32-0.38％辛酸鈉，使之與白蛋白充分結(jié)合；加入0.1M稀鹽酸，調(diào)節(jié)PH至5.8-6.0，加溫60℃-75℃保溫10小時(shí)，過濾去沉淀，清夜調(diào)PH至4.5-5.0，保溫，過濾去沉淀，收集清液；

3.濃縮、脫鹽及在位除菌過濾：清液調(diào)PH至6.8-7.2經(jīng)循環(huán)除菌，以一萬分子量超濾膜超濾濃縮、洗脫鹽分，蛋白濃縮液終濃度不超過15％；

4.冷凍干燥為晶體狀干粉。

而且，所述步驟2中當(dāng)清夜調(diào)PH至4.5-5.0時(shí)可加溫60℃-75℃，保溫2-3小時(shí)后過濾去沉淀，收集清液。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和經(jīng)濟(jì)效果是：

1.工藝過程中，60℃-75℃保溫10小時(shí)，能有效滅活病毒類外源因子，產(chǎn)品的安全性 有保障；同時(shí)徹底滅活蛋白酶，避免用戶的標(biāo)記物受影響。

2.分度加熱，減輕了蛋白變性分離過程中共沉情況，白蛋白收率提高，每100ml成牛血清得白蛋白不少于2g。

3.在位除菌，使得蛋白液在較長時(shí)間的濃縮、脫鹽過程中避免細(xì)菌滋生，排除細(xì)菌代謝物所產(chǎn)生的問題。

4.用料簡單、節(jié)約成本、工藝簡便、易于操作。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。

具體實(shí)施方式

為能進(jìn)一步了解本發(fā)明的內(nèi)容、特點(diǎn)及功效，茲例舉以下實(shí)施例，并配合附圖詳細(xì)說明如下。需要說明的是，本實(shí)施例是描述性的，不是限定性的，不能由此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1：

一種牛血清白蛋白分度熱休克法提取工藝，包括如下步驟：

1.分離血清：健康牛新鮮全血，去纖維蛋白，連續(xù)離心收集血清，紅血球另用；

2.提取：將血清和等量的生理鹽水加入反應(yīng)罐，20rpm攪拌混勻，邊攪拌邊加入0.32％辛酸鈉，使之與白蛋白充分結(jié)合；加入0.1M稀鹽酸，調(diào)節(jié)PH至5.8，加溫60℃保溫10小時(shí)，過濾去沉淀，清夜調(diào)PH至4.5，加溫60℃，保溫2小時(shí)后過濾去沉淀，收集清液，過濾去沉淀，收集清液；

3.濃縮、脫鹽及在位除菌過濾：清液調(diào)PH至6.8經(jīng)循環(huán)除菌，以一萬分子量超濾膜超濾濃縮、洗脫鹽分，蛋白濃縮液終濃度不超過15％；

4.冷凍干燥為晶體狀干粉。

實(shí)施例2：

一種牛血清白蛋白分度熱休克法提取工藝，包括如下步驟：

1.分離血清：健康牛新鮮全血，去纖維蛋白，連續(xù)離心收集血清，紅血球另用；

2.提取：將血清和等量的生理鹽水加入反應(yīng)罐，40rpm攪拌混勻，邊攪拌邊加入0.38％辛酸鈉，使之與白蛋白充分結(jié)合；加入0.1M稀鹽酸，調(diào)節(jié)PH至6.0，加溫75℃保溫10小時(shí)，過濾去沉淀，清夜調(diào)PH至5.0，加溫75℃，保溫3小時(shí)后過濾去沉淀，收集清液；

3.濃縮、脫鹽及在位除菌過濾：清液調(diào)PH至7.2經(jīng)循環(huán)除菌，以一萬分子量超濾膜超濾 濃縮、洗脫鹽分，蛋白濃縮液終濃度不超過15％；

4.冷凍干燥為晶體狀干粉。

實(shí)施例3：

一種牛血清白蛋白分度熱休克法提取工藝，包括如下步驟：