[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用液態(tài)放線菌GJ制備磷脂酰絲氨酸的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610290317.2
• 申請(qǐng)日: 2016-05-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105755064A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹文波
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 陜西冠捷生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12P13/04
• 分類(lèi)號(hào): C12P13/04
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用液態(tài)放線菌GJ制備磷脂酰絲氨酸的方法。

背景技術(shù)

磷脂根據(jù)甘油骨架的不同可以分為磷酸甘油脂(glycerolphospholipid)和鞘磷脂(sphingolipid)。它們都是極性脂。極性脂由極性部分(叫做極性頭)和非極性部分(叫做非極性尾)組成。其中，甘油磷脂又可以根據(jù)極性頭部集團(tuán)的不同區(qū)分為磷脂酰膽堿(Phosphatidylcholines，PC)、磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamines，PE)、磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserines，PS)、磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositols，PI)、磷脂酰甘油(PG)、甘油磷脂酸(phosphatidicacid，PA)等。

磷脂酰絲氨酸，又稱(chēng)復(fù)合神經(jīng)酸。英文名Phosphatidylserine，簡(jiǎn)稱(chēng)PS，由天然大豆榨油剩余物提取。是細(xì)胞膜的活性物質(zhì)，尤其存在于大腦細(xì)胞中。其功能主要是改善神經(jīng)細(xì)胞功能，調(diào)節(jié)神經(jīng)脈沖的傳導(dǎo)，增進(jìn)大腦記憶，由于其具有很強(qiáng)的親脂性，吸收后能夠迅速通過(guò)血腦屏障進(jìn)入大腦，起到舒緩血管平滑肌細(xì)胞，增加腦部供血的作用。

磷脂作為一種生物活性物質(zhì)，有著獨(dú)特的理化性質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，在世界范圍內(nèi)的食品、保健品、醫(yī)藥以及飼料行業(yè)已被廣泛使用，人們通過(guò)使用磷脂可以起到調(diào)節(jié)血脂、改善記憶、保護(hù)肝臟、健腦益智、以及延緩衰老等生理功能的作用。磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，PS)是磷脂家族中的一員，它是唯一能夠調(diào)控細(xì)胞膜關(guān)鍵蛋白功能狀態(tài)的磷脂，是人體不可或缺的物質(zhì)。所以只要正常服用磷脂酰絲氨酸類(lèi)的膳食劑并不會(huì)給身體帶來(lái)額外的負(fù)擔(dān)，并且通過(guò)了許多國(guó)家的藥監(jiān)局認(rèn)證。

磷脂酰絲氨酸的制備方法主要有萃取法和酶轉(zhuǎn)化法，其中萃取法主要是肉類(lèi)及魚(yú)類(lèi)中均含有磷脂酰絲氨酸，腦或內(nèi)臟(如肝、腎)中的含量較高。奶制品以及蔬菜中(除豆類(lèi))磷脂酰絲氨酸的含量非常少，所以萃取動(dòng)物的腦或內(nèi)臟(如肝、腎)的卵磷脂為主要途徑，目前國(guó)內(nèi)外主要以牛、羊、兔、馬、驢等家禽的腦或內(nèi)臟(如肝、腎)為原料來(lái)萃取磷脂酰絲氨酸，但是近年來(lái)由于動(dòng)物疾病的泛濫使得有動(dòng)物作為原料所得的磷脂酰絲氨酸產(chǎn)品的安全性受到人們的擔(dān)心，所以慢慢的將被淘汰。

酶轉(zhuǎn)化法主要是以天然的大豆卵磷脂為原料，加入L-絲氨酸，在磷脂酶的作用下，生成磷脂酰絲氨酸。目前國(guó)內(nèi)外的的文獻(xiàn)報(bào)道了利用卵磷脂和固態(tài)放線菌GJ轉(zhuǎn)化磷脂酰絲氨酸的方法，這些方法中的放線菌GJ的來(lái)源一般是利用發(fā)酵獲得液態(tài)的磷脂酶-D、磷脂酶-E、磷脂酶-C，由于酶在液態(tài)狀態(tài)下活性很難保持，所以把就把液態(tài)的磷脂酶通過(guò)冷凍干燥制備成固態(tài)的磷脂酶-D，這樣勢(shì)必增加了磷脂酶的成本，而且在這個(gè)過(guò)程中是相當(dāng)一部分有效的磷脂酶損失。最終導(dǎo)致固體的磷脂酶在反應(yīng)中用量增加，同時(shí)增加了反應(yīng)成本，另外，在反應(yīng)中固體的磷脂酶需要再次活化，這個(gè)過(guò)程也會(huì)引起其它反映，使得反應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)，產(chǎn)品中副產(chǎn)物多，ps的轉(zhuǎn)化率低，產(chǎn)品的狀態(tài)差，單位產(chǎn)品的成本高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種新的液態(tài)的放線菌GJ及利用液態(tài)的放線菌GJ制備磷脂酰絲氨酸的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)中磷脂酶-D價(jià)格高，產(chǎn)品中收率低，副產(chǎn)物多，生產(chǎn)成本高等問(wèn)題。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案：一種利用液態(tài)放線菌GJ制備磷脂酰絲氨酸的方法，主要包括以下步驟：

(1)將天然的大豆卵磷脂與L-絲氨酸、醋酸鈉、緩沖溶液、液態(tài)的放線菌GJ混合，在40--43度的溫度下攪拌反應(yīng)16--20小時(shí)；

其中，L-絲氨酸為天然的大豆卵磷脂的4--5倍，醋酸鈉為L(zhǎng)-絲氨酸質(zhì)量的15％，水量為天然的大豆卵磷脂的15--20倍，緩沖溶液的ph＝4.1--4.5；先將各種緩沖鹽溶于水中，使其充分溶解，再緩慢加入天然的大豆卵磷脂，攪勻，最后加入原料2--5％的液態(tài)的放線菌GJ，升溫開(kāi)始反應(yīng)；

反應(yīng)到16小時(shí)候開(kāi)始薄層跟蹤，直到反應(yīng)完全，反應(yīng)完全后溶液會(huì)清亮，反應(yīng)產(chǎn)物明顯與液態(tài)分離；

加入有機(jī)溶劑萃取，加入和緩沖溶劑等體積的有機(jī)溶劑，攪拌半小時(shí)，靜置1小時(shí)分離，收集有機(jī)相；

濃縮，回收有機(jī)溶劑，到稠膏后真空抽半小時(shí)，使浸膏內(nèi)的有機(jī)溶劑徹底沒(méi)有后加入無(wú)水乙醇分散，攪拌，離心

離心過(guò)濾后的濾餅真空干燥，既得磷脂酰絲氨酸產(chǎn)品

粉碎，過(guò)篩，包裝。

根據(jù)以上的流程及基本方案，本發(fā)明對(duì)此方案作如下要求